实验一:小鼠内耳发育不同阶段的基因表达目的:从上述已知基因中筛选出一部分在小鼠内耳发育过程中阳性表达的基因,探讨这部分基因在小鼠内耳发育的不同阶段的表达方式,为内耳发育和毛细胞再生提供了依据。方法:分别选用己知参与调控脊椎动物内耳发育的包含转录因子、分泌因子等21种不同基因,在胚胎第18天小鼠的耳蜗组织上利用RT-PCR方法扩增相应的基因片断,筛选得到阳性表达者;然后分别选取胚胎第10天、第14天、第18天小鼠和新生小鼠、出生后14天小鼠的内耳组织,利用RT-PCR法扩增上述阳性表达的基因片断,观察其在小鼠内耳不同发育阶段的基因表达差异。结果:利用RT-PCR法扩增内耳发育基因片断,筛选出小鼠内耳早期发育标志基因Otx2,BMP4,BMP7和Islet1,和毛细胞标志基因Math1,myosinⅦA,espin、支持细胞标志基因Jagged1。同时观察到,内耳早期发育标志基因Otx2,BMP4,BMP7和Islet1在小鼠内耳发育过程中不断下调,而毛细胞标志基因Math1,myosinⅦA,espin、支持细胞标志基因Jagged1在小鼠内耳发育过程中不断上调。结论:小鼠内耳发育过程中可以见到Otx2,BMP4,BMP7,Islet1,Math1,myosinⅦA,espin和Jagged1等内耳发育相关基因的表达,并且内耳早期发育标志基因Otx2,BMP4,BMP7和Islet1在小鼠内耳发育过程中不断下调,而毛细胞标志基因Math1,myosinⅦA,espin,支持细胞标志基因Jagged1在小鼠内耳发育过程中不断上调。实验二:新生小鼠耳蜗高增殖细胞及其分化细胞的培养和基因表达目的:研究新生小鼠耳蜗内是否存在高增殖前体细胞,以及此前体细胞通过培养后分化为哪些类型的分化细胞;同时研究内耳发育基因在前体细胞核分化细胞的不同基因表达方式。方法:从新生C57小鼠耳蜗内取得基底膜组织,用胰蛋白酶消化后,经过吹打、中止消化、离心和重悬等过程获得单细胞悬液,用无血清细胞培养液进行细胞培养。至第7天见到悬浮生长的细胞球后,收集接种于盖玻片上进行贴壁分化达2周。分别收集悬浮培养的细胞球和经7天、14天培养的分化细胞,运用RT-PCR技术进行内耳发育相关基因的表达分析。结果:新生小鼠耳蜗内存在有高增殖前体细胞,经体外培养后形成高增殖细胞球并进一步细胞分化。这些高增殖前体细胞球表达了内耳发育早期阶段的标志基因如Otx2,BMP4,BMP7和Islet1,并随着细胞分化成熟而逐渐下调;同时分化细胞可以表达特征性的毛细胞标志物如Math1,myosinⅦA和espin,以及支持细胞标志物Jagged1,并且随着细胞分化成熟而不断上调。结论:新生小鼠耳蜗内存在高增殖前体细胞,这些前体细胞能在体外培养形成细胞球并且进一步分化形成毛细胞样细胞和支持细胞样细胞。第二部分:中耳变压法治疗梅尼埃病的近期疗效观察目的:观察中耳变压法治疗梅尼埃病的近期疗效,以探讨常规保守治疗和手术治疗之外其他疗法的可行性。方法:选择8例确诊为单侧梅尼埃病的患者,采用Meniett仪行中耳变压治疗并评估治疗前后之平均听阈变化及症状改善情况。随访时间为1-6个月。结果:8例患者中的6例出现听力提高和眩晕改善,其中4例听力提高超过10dB;2例无任何改善者均在治疗前已行内淋巴囊减压术。Meniett仪治疗过程中未见不良反应。结论:Meniett仪为一种非创伤性治疗工具,据此行中耳变压法治疗梅尼埃病能一定程度提高听力并减轻眩晕,;己行前庭手术者会影响中耳变压治疗的效果。