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以杜仲翅果为研究对象,以蒽酮比色法测定酶解杜仲籽壳液中的总糖含量作为考察指标,进行了复合酶1、复合酶2及复合酶3对杜仲籽壳酶解预处理提取杜仲胶的工艺研究。从杜仲粕中提取出来的生物活性物质桃叶珊瑚苷,用酶部分水解为桃叶珊瑚苷苷元,并将桃叶珊瑚苷及其苷元制备成软膏。本研究的主要内容如下:
(1)酶解法处理杜仲籽壳考察指标的研究
采用差示光度法(△A法),以酶解液中的总糖含量来考察复合酶的酶解率。消除了试样背景的干扰、与普通分光光度法(即用试剂空白)相比,吸收峰明显改善,其吸收峰与葡萄糖对照品一致,重现性良好,且溶液中的酶不影响总糖含量的测定。结果表明该方法可以间接表示杜仲籽壳中杜仲胶的提取情况。
(2)复合酶酶解法提取杜仲胶的工艺优化
采用蒽酮比色法测定酶解液中的总糖含量为考察指标,研究了复合酶1处理杜仲籽壳的工艺,得较优工艺条件:水浴温度50 ℃,pH值3.8,酶用量 3%,料液比1∶15(g∶ mL),酶解2次,每次3 h;在此条件下,杜仲胶一次提取率达到57.65%,是非酶解法的1.3倍。复合酶2的较优工艺:水浴温度50 ℃、pH值 4.2、酶用量 2.1%、料液比为1∶15的,酶解2次,每次3 h;在此条件下,杜仲胶一次提取率达到52.17%,是非酶解法的1.2倍。复合酶3的较优工艺:水浴温度50 ℃、pH值 5.4、酶用量 1.5%、料液比为1∶15,酶解2次,每次3 h;在此条件下,杜仲胶一次提取率达到49.65%,是非酶解法的1.1倍。
(3)桃叶珊瑚苷的提取纯化及软膏制备
在较优上样量20 mg·g-1及最适宜的洗脱液甲醇–氯仿–石油醚–乙酸乙酯(4∶3∶2∶8)条件下,桃叶珊瑚苷通过硅胶柱分离和重结晶纯化,得纯度为95.6%的产品。在溶液pH值5.1,酶解温度为37℃、酶解时间30 min,用β-葡萄糖苷酶处理30 mg桃叶珊瑚苷,使之部分水解,得到桃叶珊瑚苷及其苷元的混合物。采用如下处方:石蜡4 g,蜂醋1.5g,苯甲酸0.01 g,抗坏血酸(维生素C)0.001 g,白凡士林4 g,将桃叶珊瑚苷制备成油脂性软膏。软膏经稳定性试验表明,基质及桃叶珊瑚苷及其苷元的性质均无变化,说明桃叶珊瑚苷软膏符合药物稳定性试验方法中的加速试验要求,为临床应用奠定了基础。