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布鲁氏菌属(Brucella)细菌侵入人体,引起传染－变态反应性人畜共患病,称为布鲁氏菌病(简称布病)。布鲁氏菌病引起哺乳动物的流产、不孕、睾丸炎及关节炎等,每年给畜牧业造成不可估量的经济损失。人布鲁氏菌病主要表现为长期的微热、慢性病,从而影响人的各个器官系统。另外,布鲁氏菌在环境中有较强的存活能力,容易被气溶胶化通过空气散播,具有很高的传染性,因此可被用作生物战剂。布鲁氏菌病的诊断主要依靠血清学的诊断方法,主要包括传统的血清学方法以及能够标准化的ELISA方法等,这些方法主要应用于既往感染的诊断,病原学的诊断主要依赖于细菌的培养鉴定和基于PCR技术的分子检测技术,但应用较少。布鲁氏菌病早期诊断是布鲁氏菌病预防与控制的关键,因此建立快速有效的检测布鲁氏菌方法是十分必要的。在本研究中,我们首先制备布鲁氏菌的单克隆抗体,然后利用这些抗体来研制布鲁氏菌的UPT免疫层析试纸。研究方法：利用布鲁氏菌免疫小鼠,选择抗体滴度高的小鼠,取脾细胞,与骨髓细胞融合,筛选针对布鲁氏菌全菌蛋白的单抗细胞株,通过分析单抗体细胞株与各个布鲁氏菌种的反应性,筛选能够检测不同种型布鲁氏菌的单抗。然后,利用制备的单抗,制备出能够检测布氏杆菌的UPT免疫层析试纸条。同时我们对研制的布鲁氏菌UPT免疫层析试纸条的敏感性、定量性、特异性、兼容性、稳定性进行了评价。最后进行小规模生产,并以白色粉末进行模拟标本进行了实验。结果表明,(1)活菌免疫与灭活菌免疫抗体滴度测定结果显示,活菌免疫的效果优于灭活菌,成功筛选到了针对布鲁氏菌的单克隆抗体,其效价在制备的单克隆抗体效价在51200-102400。(2)利用制备的布鲁氏菌单克隆抗体与UCP颗粒相结合,制备出UP T免疫层析试纸条；(3)对研制的布鲁氏菌UPT免疫层析试纸条的各项性能进行了评价。UPT免疫层析试纸条具有良好的特异性：对于常见恐怖战剂病原菌、布鲁氏菌近源菌、与布鲁氏菌有血清学交叉反应的病原菌均不能检出；具有良好的稳定性：对于菌液的各个浓度梯度均进行重复检测,CV值均<15%；有良好的兼容性,能够针对常见的几种布鲁氏菌进行检测；敏感性较为良好,检测限约5.6×104个布鲁氏菌,并在105～109具有良好的线性关系,能够进行定量检测；(4)对于模拟的白色粉末,UPT试纸条不受外部环境影响,仍然能够对布鲁氏菌进行有效检出,检测限能够保持在5.0×104个布鲁氏菌。结论：本研究制备了布鲁氏菌高亲和力的单克隆抗体,制备的抗体能够识别各个种型的布鲁氏菌,为布鲁氏菌的诊断方法的研究奠定基础；利用制备的单克隆抗体,研制了UPT免疫层析试纸,能够特异检测布鲁氏菌抗原,试纸具有很好的稳定性、兼容性和敏感性,为布鲁氏菌病的现场快速检测提供了一种新方法。