本文对结肠癌LoVo细胞对NFs的活化及CAFs对HUVEC的血管生成影响的三维共培养进行了研究。本研究分为两个部分：　　第一部分：结肠癌LoVo细胞对NFs的活化作用及活化的NFs对LoVo细胞迁移、侵袭能力的影响。　　目的：观察结肠癌LoVo细胞能否将其基质中正常成纤维细胞（Normal fibroblasts， NFs）活化为癌相关成纤维细胞（Carcer-associated fibroblasts，CAFs）并分析活化前后NFs在生物学特性和免疫表型方面的差异。探讨活化前后NFs对LoVo细胞迁移、侵袭能力的影响。　　方法：运用间接共培养方法建立NFs与LoVo细胞共培养模式，通过形态学观察和免疫细胞化学染色鉴定共培养前后二者α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达变化，以确定其是否活化；MTT法检测共培养前后NFs的增殖活性，并绘制6d生长曲线；划痕实验检测共培养前后NFs对LoVo细胞迁移能力的影响；Transwell实验检测共培养前后NFs对LoVo细胞侵袭能力的影响。　　结果：共培养后NFs倒置显微镜下呈梭形及多边形，细胞核呈双核及多核，可见切迹或凹陷，与共培养前NFs在形态学上存在明显差异；共培养后NFs表达α平滑肌肌动蛋白（α-SMA）且增殖活性较共培养前NFs明显增强；共培养后NFs组LoVo迁移、侵袭能力明显增强。　　结论：间接共培养方法建立NFs与LoVo细胞共培养体系，证实结肠癌LoVo细胞对NFs细胞存在活化作用，且活化的NFs增强LoVo细胞迁移、侵袭能力。　　第二部分：3D共培养条件下观察CAFs对血管内皮细胞血管形成的影响。　　目的：通过建立人结肠癌相关成纤维细胞（Carcer-associated fibroblasts，CAFs）和脐静脉内皮细胞（Umbilical vein endothelial cells，HUVEC）二维及三维细胞共培养模型，探讨不同培养条件CAFs对HUVEC形态及成管能力的影响，并分析CAFs在促结肠癌血管形成过程中可能作用机制。　　方法：利用条件培养基间接培养的方式建立HUVEC的二维培养；Matrigel胶构建HUVEC的体外血管生成三维培养模型；CAFs条件培养基、LoVo条件培养基、CAFs、LoVo分别与HUVEC共培养为实验组，HUVEC单独培养为对照组，通过对形成的环状结构数量进行统计对比以及Western-blot法检测各分组血管生成相关蛋白表达差异，分析人结肠CAFs对HUVEC成管能力的影响。　　结果：2D培养条件下，HUVEC呈贴壁生长，无环状结构形成，而3D培养可观察到明显的环状结构及条索状结构的形成；3D培养条件下，相比LoVo，CAFs形成环状结构数量较多，且结构密集，大小不一，差异具有显著统计学意义（P＜0.01）；Westernblot结果示，3D组蛋白相对表达量高于2D组，差异具有统计学意义（P＜0.01）。　　结论：3D培养能够最大程度模拟细胞在体内生长的三维立体状态，同时细胞与细胞间的直接接触可能是促进某些蛋白及因子分泌的条件；通过3D共培养发现结肠CAFs促进HUVEC成环的能力强于LoVo细胞；本实验成功建立体外血管生成的三维培养模型，为进一步研究结肠癌微环境在结肠癌新生血管形成过程的作用奠定基础。