【摘 要】
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乙型肝炎病毒（HBV）与原发性肝癌之间存在着密切的诱变关系，与HBV感染相关的原发性肝癌是最常见的恶性肿瘤之一。特别是HBV x基因编码的X蛋白具有反式激活作用，可激活多种病毒和细
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乙型肝炎病毒（HBV）与原发性肝癌之间存在着密切的诱变关系，与HBV感染相关的原发性肝癌是最常见的恶性肿瘤之一。特别是HBV x基因编码的X蛋白具有反式激活作用，可激活多种病毒和细胞基因，并可使肝细胞发生恶性转化，在原发性肝癌发生发展过程中起重要作用。本课题探讨了乙型肝炎病毒X蛋白对肝癌细胞凋亡的影响及其与p53和核转录因子NF-κB的关系。主要研究内容及结果如下： 1．研究X蛋白对肝癌细胞恶性表型及细胞凋亡的影响，首先用PCR技术从含HBV DNA的质粒pTTHK中扩增出完整的HBV x基因，克隆于pT7Blue载体，测定序列后定向克隆于真核表达载体pCDNA3.1-HBX，构建成HBV x基因真核表达载体pCDNA3.1-HBX，并通过脂质体介导的基因转染法将HBV x基因真核表达载体转染入人HCC-9204肝癌细胞，用G418筛选获得稳定表达X蛋白的细胞克隆。以MTT比色试验，平板集落形成实验，软琼脂克隆形成实验检测X蛋白对肝癌细胞恶性表型的影响。结果发现，稳定表达外源性X蛋白的肝癌细胞恶性度增高，细胞生长力旺盛，分裂相极多见，完全丧失接触性抑制，呈多层生长，克隆形成率明显高于未进行基因转染的亲本细胞，表明X蛋白具有生长调控蛋白作用，可促进肝癌细胞生长，增强其恶性度。 2．X蛋白除刺激肝癌细胞生长，增强其恶性表型外，是否象其它致瘤性DNA病毒一样可影响细胞凋亡呢?多种致瘤性DNA病毒编码蛋白质抑
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