消化道基因治疗为一种安全、温和、护理简单、成本低的基因治疗方式,具有广泛的应用前景.口服基因治疗须解决两个关键问题:输送载体和外源基因进入体细胞的高效持续表达.酿酒酵母是一种无害微生物,已广泛应用在食品与药品领域.酿酒酵母作为模式生物,在分子生物学研究中得到广泛重视.酵母表达系统,特别是酵母同源重组型表达系统,不仅可以很好的表达人生长激素基因,同时其无毒副作用的特性还使之成为一种安全的消化道基因治疗输送载体.泛素启动子为一哺乳动物细胞启动子,在不同体细胞内均可启动外源基因持续高效表达.该研究将泛素启动子构建于目的基因上游,连接于同源重组型酵母载体,同源重组到酿酒酵母基因组中,有利于消化道转基因后目的基因在体细胞中的表达.pHSS6-mTn-3×HA/lacZ为酿酒酵母文库质粒,每一质粒所携酿酒酵母同源序列不同,部分同源序列中有启动子结构,通过lacZ基因的表达情况,可判断读框正确与否和该启动子的强弱,以此从中筛选出理想的同源重组载体,筛选出的载体可用于表达外源基因.该载体通过mluI单酶切位点,引入带有泛素启动子的人生长激素基因(UbC-hGH),获得重组载体pHSS6-mTn-3×HA/lacZ-hGH.通过PCR鉴定,检出目的基因UbC-hGH正向插入的重组载体.重组载体经NotI酶切,电转化至酿酒酵母中,使发生同源重组.提取酵母基因组通过PCR鉴定,筛选出阳性基因重组菌落.酵母RNA的RT-PCR鉴定证明:人生长激素基因在酵母宿主菌中存在明确转录.实验结果表明,目的基因已经重组到酿酒酵母基因组中并在酿酒酵母中成功转录.该研究为进一步研究人生长激素基因在动物体细胞内的长期高水平表达、探讨消化道途径基因治疗提供条件.