囊虫病是由猪带绦虫的幼虫猪囊尾蚴感染猪或人而引起的人畜共患病,半胱氨酸蛋白酶(Cysteine protease)广泛地存在于人类、寄生虫等多种动物体内。由于寄生虫半胱氨酸蛋白酶在宿主寄生虫相互关系上起着重要作用,并且可作为寄生虫病化学治疗和免疫预防的一个极好的作用靶点,使人们越来越关注该酶的研究。本实验对猪囊尾蚴的半胱氨酸蛋白酶基因进行了克隆,表达,为该酶的进一步研究奠定了基础。从猪囊尾蚴中提取总RNA,用DNAStar软件设计TsCL-1蛋白基因特异性引物,通过RT-PCR扩增出960bp的片断,扩增产物、原核表达载体pGEX-4T-1以及真核表达载体pPIC9K分别用EcoRΙ和NotΙ进行双酶切,克隆TsCL-1基因至原核表达载体pGEX-4T-1中,转化到大肠杆菌BL21,经酶切、PCR和测序鉴定证明,TsCL-1基因正确插入到pGEX-4T-1载体。用IPTG诱导表达,表达产物通过SDS-PAGE和Western-blotting分析证实TsCL-1基因在BL21中以包涵体形式表达,分子量大小为61Ku左右,能被猪囊尾蚴阳性血清所识别;为了获得活性更好的蛋白,构建了真核表达载体pPIC9K-TsCL-1,电转化毕赤酵母GS115,将所有在营养缺陷型选择培养基MD上生长的转化子,采用G418浓度梯度进行筛选,获得了高拷贝重组菌株,PCR检测表明有目的基因的整合;用0.5%甲醇诱导表达重组菌株,通过SDS-PAGE和Western-blotting对表达产物进行分析,结果表明Tscl-1蛋白基因在毕赤酵母中成功表达,表达产物的分子量为42Ku左右,能被猪囊尾蚴阳性血清所识别。