白藜芦醇层状液晶治疗角膜新生血管的研究

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目的制备白藜芦醇层状液晶,探索层状液晶增加难溶性药物载药量的机制,分析层状液晶独特的空间结构在药物缓释和生物安全性等方面的作用。建立大鼠角膜碱烧伤模型,评价白藜芦醇层状液晶对大鼠碱烧伤后角膜新生血管的治疗作用。方法(1)白藜芦醇层状液晶的制备和评价。采用涡旋法制备白藜芦醇层状液晶,并进行结构表征。采用高效液相色谱法建立白藜芦醇的体外含量测定方法。通过粉末X射线衍射考察制剂结晶程度,并采用分子对接、红外光谱实验对制剂内部分子间作用做出探讨。(2)白藜芦醇层状液晶的介观结构研究。利用计算机模拟构建白藜芦醇层状液晶的介观模型,以此推测制剂的释放原理和生物安全性,并在体内外实验中进行验证。通过离体角膜的渗透性实验和在体光学相干断层扫描,分析白藜芦醇层状液晶的透过和滞留能力。(3)白藜芦醇层状液晶的药效学研究。将实验大鼠分为空白层状液晶组、白藜芦醇层状液晶组、白藜芦醇凝胶组和生理盐水对照组,构建角膜碱烧伤模型后,每日给药1次,共14天。采用眼前节照相仪观察角膜新生血管,拍摄照片,计算新生血管面积。碱烧伤模型制备后的第14天,制作各组大鼠的角膜病理切片,采用免疫组化法比较各组血管内皮生长因子的表达情况。结果(1)白藜芦醇层状液晶的载药量为4.4mg·g~(-1)。偏光镜观察到白藜芦醇层状液晶具有各向异性,可见典型“马尔文十字晶花”结构,小角度X光散射的峰位置比为3:4,为典型的层状液晶结构。白藜芦醇层状液晶的储能模量始终大于损耗模量。粉末X射线衍射、分子对接和红外光谱证实在白藜芦醇层状液晶中,GMO与白藜芦醇形成分子间氢键。(2)介观模拟得出白藜芦醇层状液晶内部包含脂质相和水相的双连续平行通道,乙醇和白藜芦醇均位于双通道的交界面上,两者均依赖于制剂的溶蚀而缓慢释放。光学相干断层扫描和Franz扩散池实验证明,与白藜芦醇凝胶相比,白藜芦醇层状液晶能够长时间滞留,并促进更多药物透过角膜。(3)大鼠角膜碱烧伤14天后,与生理盐水对照组、空白层状液晶组和白藜芦醇凝胶组相比,白藜芦醇层状液晶组的角膜新生血管面积较小,差异具有统计学意义(p
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