【摘 要】
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目的:通过实验测定人参皂苷CK对于G-四链体结构形成及稳定性的影响,并考察其对含G-四链体结构的癌症基因表达的调控作用,进一步探索人参皂苷CK抗癌的作用机制,为人参皂苷CK在复制和转录方面的药理学研究提供新的方向,阐明人参皂苷CK在基因层面的抗癌作用机理。方法:（1）圆二色谱测定6个富G碱基序列的二级结构,并测定熔融曲线考察人参皂苷CK对于G-四链体稳定性的影响。（2）与荧光配体N-Methyl
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目的:通过实验测定人参皂苷CK对于G-四链体结构形成及稳定性的影响,并考察其对含G-四链体结构的癌症基因表达的调控作用,进一步探索人参皂苷CK抗癌的作用机制,为人参皂苷CK在复制和转录方面的药理学研究提供新的方向,阐明人参皂苷CK在基因层面的抗癌作用机理。方法:（1）圆二色谱测定6个富G碱基序列的二级结构,并测定熔融曲线考察人参皂苷CK对于G-四链体稳定性的影响。（2）与荧光配体N-Methyl Mesoporphyrin IX（NMM）结合,在不同K+和不同浓度人参皂苷CK的条件下,考察G-四链体单链和双链体系中人参皂苷CK对于G-四链体的影响。（3）凝胶电泳实验考察人参皂苷CK在双链体系中对于G-四链体的影响。（4）加入不同的拥挤试剂改变溶液环境,通过荧光熔融曲线变化判断人参皂苷CK在不同环境下对于G-四链体稳定性的影响,与拥挤试剂的分子量、粘度和介电常数进行比较,确定影响人参皂苷CK和G-四链体间相互作用的因素。（5）合成荧光性质优越的银纳米簇,构建G-四链体含量的检测方法,定量测定人参皂苷CK对G-四链体折叠情况的影响。（6）设计包含六个G-四链体结构和一个线性序列的转录模板序列,通过体外转录实验考察人参皂苷CK对于含G-四链体的癌症基因表达的调控作用;通过荧光、凝胶电泳等手段,考察人参皂苷CK对于模板序列中G-四链体折叠情况的影响及对转录产物长度和产量的调控作用。结果:（1）圆二色谱确定6个富G碱基序列能够形成G-四链体,并且人参皂苷CK在不改变序列构型的情况下,具有稳定G-四链体的作用;（2）荧光检测结果表明,在G-四链体与单链及双链的竞争体系中,人参皂苷CK的加入使得G-四链体含量增加,并且荧光强度随人参皂苷CK浓度的增加而增强,于CK浓度达到100μM时趋于饱和;（3）凝胶电泳实验证明人参皂苷CK具有稳定G-四链体的作用,并使双链平衡体系趋向于G-四链体形成的方向;（4）通过加入不同拥挤试剂改变溶液环境,根据Tm值变化考察人参皂苷CK在不同环境下对于G-四链体稳定性的影响,结果发现静电作用是人参皂苷CK和G-四链体间相互作用的重要影响因素;（5）利用荧光银纳米簇构建的检测方法于10-750 n M检测范围内定量测定G-四链体含量,结果发现10μM的人参皂苷CK可使体系中1.6%的c-myc序列折叠形成G-四链体,150μM的人参皂苷CK可使体系中91.4%的c-myc序列折叠形成G-四链体。（6）转录结果表明人参皂苷CK的加入稳定模板中G-四链体结构,使转录产生暂停、滑动及终止,降低完整转录产物的生成并增加终止转录产物的产生,人参皂苷CK的加入降低了整体转录效率,调节了癌症基因的表达,解释了人参皂苷CK的抗癌机制。结论:（1）通过定性、定量的分析结果确定人参皂苷CK具有稳定G-四链体的作用。（2）静电作用是人参皂苷CK和G-四链体相互作用的重要影响因素。（3）人参皂苷CK能够降低含G-四链体结构模板的整体转录效率,抑制癌症基因的表达。
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