目的:口腔鳞癌(oral squamous cell carcinomas,OSCC)是头颈部常见的恶性肿瘤之一,占颌面部恶性肿瘤的80%以上[1]。近年来其发病率有逐年上升的趋势。目前临床上的治疗方法以手术切除为主,辅以放疗或者化疗,但疗效不理想,预后差,术后5年生存率仅为60%左右[2]。因此深入了解口腔鳞癌的发病机制、早期诊断及预后分析显得十分迫切。E2F是1986年Rovesdi等在进行腺病毒E2启动子激活的研究时发现的一个新的细胞因子[3]。E2F家族成员有8个,包括E2F1到E2F8,其中E2F1被研究的最多,其在细胞周期调控和细胞凋亡、增殖等方面都发挥着重要作用。目前已有一些研究证实E2F1在人类很多肿瘤中高表达,这表明E2F1发挥着癌基因的作用。但另外的一些研究却提示E2F1也可能具有抑癌基因的作用。E2F1在肿瘤形成中是起癌基因作用还是抑癌基因作用可能与肿瘤抑制途径有关,但其具体机制尚未完全清楚。Survivin是凋亡抑制蛋白家族中的一员,是目前发现最强的凋亡抑制因子[4]。其主要作用为:1抑制细胞凋亡2诱导细胞分化3参与细胞有丝分裂4促进血管生成。现在的研究表明,Survivin在绝大多数恶性肿瘤中高表达,而在成人大多数正常组织均测不到其表达。这个特点使其近年来成为肿瘤治疗新的焦点。P53基因是1979年Lane等在SV40感染的小鼠细胞中发现的,它是人类肿瘤中最常发生突变的肿瘤抑制基因,在细胞周期的调控中起重要作用。本实验的目的是通过对口腔鳞癌组织病理标本进行E2F1、Survivin、P53的检测,了解E2F1、Survivin、P53在口腔鳞癌组织和正常粘膜组织中的表达情况,初步探讨其与口腔鳞癌临床特征和预后的关系,为口腔鳞癌的早期诊断、治疗及预后提供参考依据。方法:收集河北医科大学第四医院口腔科2013年1月至2014年12月期间52对手术切除的口腔鳞癌及其对应的切缘正常粘膜组织标本。所有的口腔鳞癌患者术前均未做放疗或化疗。标本均为术后立即取材,分两份,一份固定于4%甲醛溶液,石蜡包埋;另一份固定于70%酒精,4℃保存。1免疫组织化学检测E2F1、Survivin和P53在口腔鳞癌组织及正常口腔粘膜组织中的表达取各组包埋组织的蜡块,用石蜡切片机连续切片,厚度为4μm,常规脱蜡至水,按照S-P试剂盒操作说明进行操作,通过镜下观察,比较各组间E2F1、Survivin和P53蛋白表达的差异是否有统计学意义。2流式细胞术测定E2F1、Survivin和P53在口腔鳞癌组织及正常口腔粘膜组织中的表达取70%乙醇固定的标本,将其制作成单细胞悬液;加入E2F1、Survivin和P53一抗工作液,室温下孵育30分钟;加入羊抗鼠FITC-Ig G二抗工作液,室温下静置1小时;机检。3结果判断标准3.1免疫组织化学E2F1、P53染色阳性为细胞核内呈现棕褐色的颗粒;Survivin染色阳性为细胞质或胞核中呈现棕黄色的颗粒。以免疫组化半定量法评价其表达。3.2流式细胞术蛋白表达定量分析以对数方式采集数据,以实验样品蛋白表达的平均荧光强度表示各组蛋白的含量。4统计学方法应用SPSS13.0统计软件进行统计学处理,组间率的比较采用χ2检验、秩和检验,等级相关性比较采用Spearman相关性分析,P<0.05为有显著性差异,P<0.01为有极显著差异。结果:1免疫组化检测E2F1、Survivin和P53在口腔鳞癌组织及正常口腔粘膜组织中的表达E2F1在口腔鳞癌组织中的阳性表达率为75.00%(39?52),高于在正常口腔粘膜组织中的阳性表达率36.60%(18?52)(P<0.01);Survivin在口腔鳞癌组织中的阳性表达率为88.50%(46?52),高于在正常口腔粘膜组织中的阳性表达率3.80%(2?52)(P<0.01);P53在口腔鳞癌组织中的阳性表达率为82.70%(43?52),高于在正常口腔粘膜组织中的阳性表达率11.50%(6?52)(P<0.01)2流式细胞术检测E2F1、Survivin和P53在口腔鳞癌组织及正常口腔粘膜组织中的表达E2F1在口腔鳞癌组织的均道值为393.47±10.48,高于正常口腔粘膜组织的均道值280.35±22.38(P<0.01)。Survivin在口腔鳞癌组织的均道值为412.38±18.80,高于正常口腔粘膜组织的均道值78.69±29.66(P<0.01)。P53在口腔鳞癌组织的均道值为400.98±10.45,高于正常口腔粘膜组织的均道值289.19±19.70(P<0.01)。流式细胞术结果显示,E2F1、Survivin和P53在口腔鳞癌组织和正常口腔粘膜组织中的表达存在极显著差异,与免疫组化结果相符合。3口腔鳞癌组织中E2F1、Survivin和P53的表达与病理及临床特征的关系免疫组化结果显示E2F1的表达与细胞分化、淋巴结转移及TNM分期无明显相关性(P>0.05);Survivin和P53的表达与细胞分化、淋巴结转移及TNM分期有相关性(P<0.05)。流式细胞术结果与免疫组化结果相一致。两种方法检测均得到E2F1、Survivin和P53的表达与患者年龄、性别无明显相关性(P>0.05)。4口腔鳞癌组织中E2F1、Survivin和P53表达的相关性免疫组化结果显示,口腔鳞癌组织中E2F1蛋白的表达强度分别与Survivin和P53蛋白表达的强度呈强正相关(rs1=0.446,P1<0.01;rs2=0.386,P2<0.01)。流式细胞术检测蛋白的均道值与组化蛋白表达结果相一致,E2F1蛋白与Survivin和P53蛋白均道值分别呈强正相关。结论:1 E2F1、Survivin和P53在口腔鳞癌组织中高表达。2 E2F1的表达与性别、年龄、细胞分化、淋巴结转移及TNM分期无关;Survivin和P53的表达与细胞分化、淋巴结转移及TNM分期有关,但与年龄及性别无关。3 E2F1在口腔鳞癌组织中的表达分别与Survivin和P53的表达呈强正相关,推测E2F1在口腔鳞癌发生发展中与Survivin和P53协同发挥重要的作用。