探索SAGA复合体的成分蛋白-Tra1在真核基因转录起始的作用

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在真核生物中,由RNA聚合酶Ⅱ介导的转录是一个极其复杂并受到严格调控的过程。转录因子首先结合至目标基因的上游激活序列(UAS,upstreamactivationsequences),然后通过招募转录辅助复合体(coactivators)如SAGA和SWI/SNF等破坏紧密的染色质结构,为目的基因的表达提供适当的空间;进而间接招募TBP(TATAbindingprotein)、普通转录因子(GTFS,generaltranscriptionfactors)、RNA聚合酶Ⅱ到启动子上,形成转录预起始复合体(preinitiationcomplex)。Tra1是SAGA复合体的重要成分蛋白,被认为是负有组合SAGA并和转录因子直接结合以便将SAGA带至目标基因作用。本课题研究是在我们实验室已标定的Tra1和转录因子结合的作用功能区的基础上,引入缺失突变或点突变,检查突变Tra1基因对目标基因的转录及细胞的生理现象如生长速率、细胞周期等的影响。我们的实验发现引入的缺失突变是致死的,引入的四个点突变有两个对细胞生长有明显的影响,并且表现为温度敏感型,得到的突变菌种为下一步工作提供了方便。此外,我们克隆了2个可能受Tra1蛋白调控的目标基因,并克隆表达了SAGA复合体及NuA4复合体中的11个蛋白,这些结果的获得为进一步探讨Tra1在SAGA复合体的组装及与转录因子结合,诱发转录起始的作用机制奠定了基础。
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