双孔钾通道TREK-1在急性脑缺血中的作用研究

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目的:双孔钾通道TREK-1激活剂亚麻酸(ALA)干预急性脑缺血大鼠,观察TREK-1通道激活对脑缺血的保护作用。方法:线栓法制作大鼠急性脑缺血模型(MCAO),激光多普勒脑血流仪检测缺血区域脑血流,将造模后大脑皮质局部脑血流下降≥30%的动物纳入下一步实验;实验动物分为5组,分别为假手术组(N.S)、模型组(N.S)、亚麻酸小剂量组(ALA1uM),亚麻酸中剂量组(ALA10uM)和亚麻酸大剂量组(ALA100uM),10只/组;亚麻酸小、中、大剂量组动物经脑室分别给予1uM、10uM和100uM ALA,5uL/只,假手术组和模型组动物经脑室给予N.S5uL;激光多普勒脑血流仪再次检测缺血区域脑血流;造模5小时后,单盲法对亚麻酸干预MCAO大鼠进行Garcia JH神经功能评分,激光多普勒再次记录局部脑血流值;造模6小时后处死大鼠,断头取脑和基底动脉,实时荧光定量PCR和Western Blot法检测TREK-1通道在脑皮质和基底动脉的表达情况。同时,脑组织冠状位连续切片,红四氮唑(TTC)染色计算脑梗死面积。结果:1、与假手术组比较,模型组大鼠神经功能评分明显下降,有统计学意义(P<0.05);亚麻酸各剂量组大鼠神经功能评分均增高,其中亚麻酸大、中剂量组动物神经功能评分升高与模型组比较具有统计学意义(P<0.05)。与假手术组比较,模型组动物局部脑血流下降,有统计学意义(P<0.01):亚麻酸各剂量组大鼠局部脑血流均有不同程度升高,其中亚麻酸大、中剂量组大鼠脑血流升高与模型组比较具有统计学意义(P<0.05)。模型组大鼠脑TTC染色脑梗死明显;亚麻酸中、大剂量组大鼠脑TTC染色显示脑梗死体积下降,其中亚麻酸大剂量组大鼠脑TTC染色脑梗死体积下降与模型组比较具有统计学意义(P<0.05)。2、Real-time PCR结果显示,与假手术组比较,模型组与亚麻酸大剂量组大鼠脑皮质区TREK-1基因表达增加(P<0.05);与假手术组比较,各组大鼠基底动脉TREK-1基因表达无明显差异(P>0.05)。Western Blot结果显示,假手术组、模型组和亚麻酸各剂量组大鼠脑皮质区均有TREK-1通道蛋白表达,其中以亚麻酸大剂量组TREK-1通道蛋白表达水平最高,其次是缺血组和假手术组。结论:双孔钾通道TREK-1激活剂α-亚麻酸经脑室干预MCAO模型大鼠,可增加缺血区局部血流量,减轻脑组织缺血坏死,对脑缺血具有保护作用,与脑皮质TREK-1激活相关。
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