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鱼藤酮(Rotenone)是一种由醉鱼科植物毛鱼藤的胶状液汁提取的化学物质,由于它具有杀虫谱广、不易产生耐药性、残效期短等特点,在蔬菜、果树和药材等作物的虫害防治中被广泛应用,是20世纪40年代以来一直被视为最安全有效的杀虫剂之一。 鱼藤酮脂溶性很强,因此很容易通过生物膜,且不需依赖多巴胺转运体就可以直接进入胞浆内,并选择性地抑制线粒体呼吸链复合体Ⅰ(NADH2泛醌还原酶)。因为鱼藤酮对复合物Ⅰ有较强的亲和力,可选择性地阻断铁-硫簇N2与泛醒Q的作用,从而中止线粒体呼吸链的正常运转,导致细胞对氧的利用障碍和能量产生不足,并引发脂质过氧化和自由基的产生。后者可进一步造成线粒体DNA的突变和蛋白质的变性,严重影响细胞的代谢。 流行病学调查显示,环境因素如农药或杀虫剂可能是帕金森病(Parkinson disease,PD)的一个危险因子。长期生活在农场、郊区以及经常接触农药或杀虫剂的人群,PD患病率明显高于非暴露人群,因此鱼藤酮对人体的危害已引起高度重视。但目前对于鱼藤酮的毒性研究大部分集中在中枢神经系统尤其是帕金森病的发病机制上,对人体主要脏器的毒性作用研究很少。鱼藤酮可通过直接接触、吸入等途径引起中毒,而肝脏和肾脏是毒物代谢、排泄的重要场所。因此当鱼藤酮进入体内是否会对胃、肝脏和肾脏等重要脏器造成损伤尚很少报道。 目的:研究鱼藤酮注射对大鼠胃、肝脏和肾脏等重要脏器的形态学改变,为进一步探讨鱼藤酮对人体的毒性作用提供理论基础。 方法: 1、动物分组及取材 成年雄性SD大鼠24只,体重260-280g,由河北医科大学实验动物中心提供,随机分为四组:①3天对照组(Con-3),②28天对照组(Con-28),③鱼藤酮注射3天组(Rot-3),④鱼藤酮注射28天组(Rot-28)。鱼藤酮注射组大鼠经背部皮下注射鱼藤酮,给药剂量1.5mg/kg/day(溶剂葵花油),对照组背部皮下只注射等剂量的溶剂,每天分早、晚两次给药。分别于注射鱼藤酮第3天、28天后称重并6%水合氯醛(5ml/kg体重)腹腔注射麻醉大鼠,分离右侧颈总动脉收集血液,3000rpm离心10分钟分离血浆,4℃保存,用于血浆谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、碱性磷酸酶(ALP)、总蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、总胆红素(T-Bil)和直接胆红素(D-Bil)的测定,取胃、肝脏和肾脏用于重量指数和形态学观察。 2、测定指标及方法 2.1大鼠一般状态观察 鱼藤酮注射前后,观察大鼠毛色、动作、精神状态等的改变。 2.2大鼠体重测定 分别于大鼠注射鱼藤酮前、注射3天后、注射28天后进行体重称量并详细记录数据,观察实验前后体重的改变情况。 2.3肝脏和肾脏重量指数的测定 取肝脏和肾脏,用0℃生理盐水清洗掉多余血液,再用干净滤纸吸去表面的水分后称量重量并做记录。其中肾脏的重量指数以左右肾的平均重量为准。 2.4血浆生化指标测定 ALT、AST、ALP、TP、ALB、T-Bil、D-Bil均由美国生产的OlympusAu2700型全自动生化分析仪测定 2.5脏染色观察胃、肝脏和肾脏的形态结构 胃、肝脏和肾脏称重后,将胃、肝脏和肾脏放入4%多聚甲醛的固定液内进行固定。固定好的标本采用常规的石蜡切片法进行切片并进行HE染色,在光学显微镜下观察胃、肝脏和肾脏的形态学改变,用日产Olypus光学显微镜进行拍照。 结果: 1、大鼠一般状态观察结果 Con-3和Con-28两对照组大鼠的毛发光滑、洁白、干净,活动正常,鱼藤酮注射3天后,大鼠出现捕捉时反抗动作减少的现象,鱼藤酮注射28天后,大鼠毛色出现发黄、变脏及竖毛,并逐渐出现主动活动减少、动作迟缓、体重减轻、弓背屈曲样姿势。 2、大鼠体重的改变 Rot-3组大鼠与Con-3组之间体重无明显变化(P>0.05),Rot-28组大鼠与Con-28组相比体重降低,具有明显差异(P<0.01)。 3、肝脏和肾脏重量指数改变 肝和肾的重量检测结果发现:Rot-3组大鼠和Con-3组相比肝的重量无明显差异(P>0.05),Rot-28组大鼠与Con-28组相比,肝重量明显增加(P<0.05);Rot-3组大鼠(P<0.01)和Rot-28组(P<0.05)大鼠与各自的对照组相比肾的重量均明显增加。 4、血浆生化指标检测结果 Rot-3组大鼠与Con-3组相比,只有TP明显减少,具有统计学意义(P<0.05),ALT、AST、ALP、ALB、T-Bil和D-Bil的量均无显著改变(P>0.05);Rot-28组大鼠与Con-28组相比,只有ALT明显减少,具有统计学意义(P<0.01),TP、AST、ALP、ALB、T-Bil和D-Bil的量均无显著改变(P>0.05)。 5、胃、肝脏和肾脏的形态结构改变 大鼠胃组织HE染色结果观察:Con-3组与Con-28组大鼠粘膜层胃腺结构清晰完整,呈单管状或分支管状,主细胞紫蓝色、壁细胞红色染色较深,胃小凹结构正常;粘膜下层血管、淋巴管结构正常清楚;肌层完整。Rot-3组大鼠粘膜层胃腺结构较清晰完整,主细胞与壁细胞均呈轻度水肿状,染色较浅,胃小凹略扩张。Rot-28组大鼠粘膜层胃腺结构较紊乱,主细胞与壁细胞均呈现水肿改变,细胞体积增大,尤以壁细胞明显呈粉色,胃小凹扩张;粘膜下层血管、淋巴管扩张,肌层未见结构改变。 大鼠肝组织HE染色结果观察:Con-3组与Con-28组大鼠肝组织肝小叶结构清楚,中央静脉清晰,肝索、肝血窦结构正常。Rot-3组大鼠可见肝血窦略有扩张充血,中央静脉略扩张,Rot-28组大鼠肝血窦扩张充血明显,肝血窦出现融合现象,肝板解离甚至完全破坏,中央静脉扩张明显。 大鼠肾组织HE染色结果观察:Con-3组与Con-28组大鼠肾小球清晰,无萎缩、纤维化,肾小管无明显水肿。Rot-3组大鼠肾小球偶见萎缩,肾小管水肿。Rot-28组大鼠肾小球可见萎缩,肾小管水肿,间质充血水肿。 结论: 1、鱼藤酮注射能使大鼠胃、肝脏和肾脏等产生明显的组织结构改变,生理功能严重受损,对机体重要脏器具有明显的毒性损伤作用。 2、鱼藤酮注射还引起大鼠出现类似PD等神经系统损伤样表现,进一步证实鱼藤酮对中枢神经系统有毒性损伤作用。