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目的:本实验中,我们将小鼠的气管切开,然后将博来霉素一次性注入小鼠气管内,制造小鼠肺的纤维化模型,再给予小鼠胃内灌入1,25(OH)2D3;在术后的7、14、28天每组各处死1/3小鼠,观测鼠肺的病理学改变并测算肺内羟脯氨酸的量,进而研究治疗组中1,25(OH)2D3对肺纤维化的干预作用,检测不同时间点各组小鼠肺组织Smad3、Smad7的表达,探讨1,25(OH)2D3干预肺纤维化的可能机制。为肺纤维化的临床药物治疗提供新选择。方法:雄性C57BL/6小鼠(SPF级)100只,10只机动,其余90只随机分为3组,每组30只:向治疗组小鼠(A组)和模型组小鼠(B组)的气管内注入5mg/kg的博来霉素;向对照组小鼠(C组)气管内注射等体积的生理盐水。自造模第2天起,每天向治疗组胃内灌入0.5g/kg加入了蓖麻油稀释的1,25(OH)2D3,向模型组和对照组胃内灌入等体积的蓖麻油+生理盐水的混合液。在术后的7、14、28天每组各处死1/3小鼠。取小鼠的右肺上叶使用10%中性甲醛固定,以作石蜡切片和免疫组织化学染色使用,余下的肺组织使用液氮速冻以作羟脯氨酸含量测定使用。采用双盲原则,在光镜下对经过HE和Masson染色的肺组织切片进行观察,然后按照统一的标准确定肺泡炎及肺纤维化的分级及评分。选用试剂盒测定羟脯氨酸含量,免疫组化染色法测定Smad3、Smad7的表达量,具体操作按照说明书进行。通过秩和检验比较对照组、模型组和治疗组小鼠肺泡炎和肺纤维化的特点;采用方差分析比较三组羟脯氨酸含量、Smad3及Smad7的表达量差别。选用SPSS21.0统计软件,对实验数据进行统计学处理,以P<0.05表示差异有统计学意义。结果:在模型建立后,模型组小鼠出现活动减少、呼吸急促,治疗组小鼠也出现上述症状,但给予1,25(OH)2D3灌胃后与模型组相比小鼠症状好转,相对活跃,呼吸困难症状轻;治疗组小鼠7天时肺组织可见轻度水肿,14天时可见水肿充血、出血点,28天时肺组织体积变小,介于对照组及模型组之间,质地变硬,表面见散在结节,但各时期均较模型组改变轻;治疗组在7、14天的肺泡炎程度以及在14、28天的肺纤维化程度与模型组相比均减轻(均P<0.05);治疗组在14、28天的羟脯氨酸水平较模型组减低(P<0.01);治疗组在7、14、28天的Smad3表达量较模型组低(P<0.01),在7、14、28天较对照组明显的增加(P<0.01);治疗组Smad7表达量在14、28天相比模型组增加(P<0.05),在7、14、28天相比对照组低(P<0.01)。结论:1.将博来霉素一次性灌入小鼠气管内,可成功使小鼠肺部出现炎症和纤维化的病理改变。2.在博来霉素诱导的小鼠继发性间质性肺炎中,羟脯氨酸表达增加,Smad3蛋白的含量增加,Smad7蛋白的含量降低。3.在博来霉素诱导的小鼠继发性间质性肺炎中,1,25(OH)2D3对肺纤维化起到抑制作用。4.1,25(OH)2D3能有效的抑制TGF-β1/Smad通路中Smad3因子的高表达,同时促进该通路中起负性调控作用的Smad7因子的表达增加,提示1,25(OH)2D3能发挥抗纤维化作用并与调控Smad蛋白表达有关。