【摘 要】
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本研究的目的是建立应用实时定量PCR技术(real-time quantitative PCR, RQ-PCR)快速检测人全血标本中烟曲霉(Aspergillus fumigatus)基因组载量的方法及临床检测应用,以推断
【出 处】
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北京协和医学院(中国医学科学院) 北京协和医学院 中国医学科学院 清华大学医学部
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本研究的目的是建立应用实时定量PCR技术(real-time quantitative PCR, RQ-PCR)快速检测人全血标本中烟曲霉(Aspergillus fumigatus)基因组载量的方法及临床检测应用,以推断肠屏障损伤的后果及疗效。本研究中,选择烟曲霉基因组多拷贝基因ITS1-5.8S作为靶基因设计特异性引物和TaqMan探针,采用QIAamp?DNA Blood Mini Kit提取烟曲霉基因组DNA,建立20μl RQ-PCR反应体系,对含有不同载量烟曲霉的模拟人全血标本和66份外科发热患者全血标本进行烟曲霉基因组的定量检测。结果显示本方法的特异性良好,检测限为10-1基因组/μl上机待测液(即约78 CFU/ml全血)；检测灵敏度和特异度分别为99.04%和94.25%,阳性预告值和阴性预告值分别为97.63%和97.62%;测定结果的平均相对误差为(3.67±13.19)%；批内及批间平均重复性变异系数(CV)分别为(12.38±1.53)%和(16.27±2.72)%；人血标本中烟曲霉基因组平均回收率为(107.81±25.92)%,回收率平均变异系数为(26.24±5.62)%。66份外科发热患者血标本中未检测出烟曲霉基因组。RQ-PCR可以快速、特异、灵敏地定量检测人血标本中烟曲霉基因组的载量,且有着较好的准确度与精密度。外科发热患者血中烟曲霉基因组的存在率可能很低。
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