第一部分Syk在人腺上皮恶性肿瘤细胞中的表达一、Syk在人不同腺上皮组织来源肿瘤细胞株中的表达目的:探讨不同组织来源的人腺上皮肿瘤细胞中Syk的表达。方法:应用免疫组织化学染色法检测7种人腺上皮肿瘤细胞株中Syk蛋白的表达。结果:人乳腺癌细胞MCF-7中Syk蛋白表达阳性,而MDA-MB-231则表达阴性;人胰腺癌细胞PANC-1、SW1990和Capanc-2中Syk蛋白均表达阳性;人肺腺癌细胞株GLC-82和肝癌细胞株SMMC-7721中Syk蛋白均表达阳性。结论:Syk在绝大部分人腺上皮恶性肿瘤细胞株中呈阳性表达,提示Syk有可能成为腺上皮来源恶性肿瘤患者的诊断等临床应用的生物学指标。二、乳腺癌、胰腺癌组织中Syk的表达及其临床意义目的:探讨syk基因及其蛋白在人乳腺癌及其胰腺癌组织中的定量表达及其临床意义。方法:采用免疫组织化学法和荧光定量PCR法分别检测30例人乳腺癌及其22例胰腺癌癌组织、对应正常乳腺组织中sykmRNA和蛋白的表达变化,探讨syk与临床病理特征的关系。结果:30例乳腺癌组织和对应正常乳腺组织中sykmRNA阳性表达率分别为63.3%（19/30）、93.3%（28/30）;癌组织中sykmRNA的平均表达水平（6.17±0.0.65）×10⁴明显低于对应的正常乳腺组织（80.37±0.125）×10⁴,两者之间有显著性差异（P<0.001）。Syk蛋白在乳腺癌癌组织和正常乳腺组织中阳性表达率分别为60%和90%,两者之间有显著性差异（P<0.01）。sykmRNA和蛋白表达下调与乳腺癌淋巴结转移和临床TNM分期显著相关（P<0.05）,而与肿瘤的大小、病理分级、ER和PR状况无关（ P>0.05）。22例胰腺癌患者的癌组织和正常胰腺组织中sykmRNA阳性表达率分别为63.6%和90.9%。胰腺癌组织sykmRNA平均表达水平为（4.45±0.225）×10⁴,明显低于对应的正常胰腺组织（52.9±0.026）×10⁴,两者之间有显著性差异（P<0.001）;Syk蛋白在胰腺癌和正常胰腺组织中阳性表达率分别为54.5%（12/22）,86.3%（19/22）,两者之间有显著性差异（P<0.01）;syk mRNA和蛋白表达率/水平的下调与胰腺癌临床TNM分期、腹腔淋巴结转移显著相关（P<0.05）,而与肿瘤的大小、病理分级无关（P>0.05）;胰腺癌患者Syk蛋白与sykmRNA表达一致率为87.5%;22例胰腺癌组织有13例p53蛋白表达阳性,阳性表达率为59.1%,16例有腹腔淋巴结转移的胰腺癌组织有8例p53表达阳性,阳性表达率为50.0%,无腹腔淋巴结转移的6例胰腺癌组织有5例p53表达阳性,有淋巴结转移与无淋巴结转移胰腺组p53蛋白表达差异有显著性,有淋巴结转移组p53蛋白阳性率低于无淋巴结转移组（P<0.05）;p53蛋白表达阳性的13例胰腺癌瘤体中,10例检出sykmRNA的表达,p53蛋白阴性6例胰腺癌组织中只有2例检出syk mRNA的表达,p53蛋白表达阳性的胰腺癌组织中,Syk的表达检测值高于p53表达阴性的胰腺癌组织（P<0.05）,Syk的表达与p53表达呈正相关（r=0.8531）。22例胰腺癌组织中,Syk⁺⁺⁺、Syk⁺⁺、Syk⁺、Syk^-患者的平均生存时间分别为12、10.3、5.6、1.8个月,各组之间有显著差异（P<0.01）,Syk阳性表达越强,患者的平均生存时间越长。结论:sykmRNA和蛋白表达率/水平降低或缺失可能与乳腺癌及其胰腺癌发生、浸润、转移有关。第二部分人腺上皮肿瘤患者术前化疗后肿瘤组织Syk的表达变化及其临床意义一、洛铂术前化疗后乳腺癌组织Syk的表达及其临床意义（一）注射用洛铂在乳腺癌患者体内的药代动力学研究目的:探讨注射用洛铂在乳腺癌患者体内的药代动力学研究方法:应用高效液相色谱法检测8例乳腺癌患者血浆及乳腺癌组织中洛铂的药物浓度及其分别检测40例乳腺癌患者应用洛铂化疗前、后第1、3、5、21天的血常规、生化全项、出凝血时间、免疫功能等指标的变化。应用高效液相色谱法检测患者化疗前、化疗后第24小时,血浆中和乳腺癌组织中的洛铂药物浓度;应用HE染色,显微镜观察术前化疗后乳腺癌肿瘤细胞形态学改变。结果:洛铂在乳腺癌患者血浆中药代动力学符合二室模型拟合,药代动力学参数如下:将洛铂按照50mg/m²体表面积给药,输注完毕后0、0.2、0.5、1、2、4、6、8、12、24小时的平均血药浓度分别为26.26±3.10、16.83±2.00、11.24±1.63、6.43±1.45、4.45±1.57、2.19±0.26、1.53±0.25、0.79±0.18、0.47±0.11、0.02±0.01mg·L^-1;最大血药浓度(C_max)为25.56±3.04mg·L^-1;分布半衰期(T_1/2α)为15±2.4min;消除半衰期(T_1/2β)为162±15min;药物由周边室至中央室的转运速率常数（K21）为1.00±0.28/小时;药物自中央室消除速率常数（K10）为0.74±0.11/小时;药物自中央室至周边室的转运速率常数（K12）为1.31±0.27/小时;药时曲线下面积（AUC）为35.20±5.47g·h·L^-1;血浆清除率（CL）为8.73±1.51L·h^-1。8例行术前化疗的乳腺癌患者,乳腺癌组织中洛铂的平均血药浓度为0.23±0.15mg·L^-1,明显高于同时间点血浆中的洛铂浓度0.02±0.01mg·L^-1（P<0.0001）。乳腺癌患者在术前化疗应用洛铂化疗前（0天,手术当日）与化疗后第1、3、5、21天的血常规、生化全项、出凝血时间、免疫功能等指标没有显著差异。输注洛铂24小时后,乳腺癌组织中洛铂的平均血药浓度为0.23±0.15mg·L^-1,为有效药物浓度,且明显高于同时间点（输注24小时后）血浆中的洛铂浓度0.02±0.01mg·L^-1（P<0.0001）,此时,血浆中的药物浓度已经低于有效药物浓度;组织病理学观察结果显示:洛铂术前化疗的乳腺癌组织细胞坏死明显,细胞空泡变性增多,核固缩、凝固性坏死显著,肿瘤组织及其周围组织中可见大量淋巴细胞和嗜酸性细胞浸润。结论:将洛铂按照50mg/m²体表面积给药,在输注洛铂24小时后,肿瘤组织中洛铂药物浓度明显高于同时间点血浆中药物浓度。洛铂可用于乳腺癌患者术前化疗。（二）乳腺癌患者经洛铂术前化疗后肿瘤组织中Syk的表达变化及其临床意义目的:探讨乳腺癌患者洛铂术前化疗后肿瘤组织中Syk表达变化及其临床意义。方法:应用免疫组织化学染色法和荧光PCR法分别检测人乳腺癌细胞株MCF-7和MDA-MB-231经洛铂作用24小时及其30例初治且术前无化疗史的乳腺癌患者和30例乳腺癌患者经洛铂术前24小时,肿瘤细胞或组织中Syk和p53的表达变化及其乳腺癌细胞的形态学改变。结果:经洛铂处理或经洛铂术前化疗后,人乳腺癌细胞MCF-7和MDA-MB-231及乳腺癌组织中sykmRNA及其蛋白表达均明显增高。MCF-7细胞中sykmRNA的表达值由1.41×10⁴升高到3.13×10⁴ ;MDA-MB-231细胞则由阴性转为阳性表达,表达值从0升高到1.11×10⁴;对照组和实验组患者的癌组织中sykmRNA阳性表达率分别为63.3%和86.7%,其均值分别为（6.17±0.065）×10⁴和（26.39±0.017）×10⁴,两者之间有显著性差异（P<0.001）。组织病理学观察结果显示,实验组较对照组患者的肿瘤细胞坏死明显,细胞空泡变性增多,核固缩、凝固性坏死显著,肿瘤组织及其周围组织中可见大量淋巴细胞和嗜酸性细胞浸润。实验组较对照组乳腺癌组织中Syk蛋白表达明显增强,染色深,颗粒粗。结论:乳腺癌患者经洛铂术前化疗后,肿瘤组织syk mRNA和蛋白表达水平明显增强。二、术前吉西他滨化疗后胰腺癌组织Syk的表达变化及其临床意义目的:探讨术前化疗吉西他滨化疗后胰腺癌组织Syk的表达、组织病理学变化及其临床意义。方法:应用HE染色和免疫组化法分别检测实验组（术前24小时术前吉西他滨化疗）及对照组（未行任何化疗的）胰腺癌患者正常胰腺组织及其癌组织细胞形态学改变、Syk和p53表达变化及其相互关系。结果:实验组患者正常胰腺组织及癌组织中Syk的阳性表达率分别为92.3%、76.3%。对照组患者正常胰腺组织和癌组织Syk的阳性表达率分别为89.2%、54.5%;两组之间胰腺癌组织Syk的阳性表达率有显著性差异（P<0.01）。实验组与对照组患者癌组织中的p53蛋白阳性表达率分别为79.3%、59.9%,两者呈正相关。组织病理学观察结果显示,实验组较对照组患者的胰腺癌组织细胞坏死明显,细胞空泡变性增多,核固缩、凝固性坏死显著,肿瘤组织及其周围组织中可见大量淋巴细胞和嗜酸性细胞浸润。另外,对照组胰腺癌组织中Syk表达水平较低,染色浅,颗粒不明显;而正常胰腺组织中Syk呈强阳性表达,颗粒明显。与对照组相比,实验组患者的胰腺癌细胞中Syk的表达水平明显增强,染色深,颗粒粗,Syk染色接近正常胰腺组织表达。结论:胰腺癌患者术前吉西他滨化疗可明显提高Syk的阳性表达率,可改善患者预后。第三部分术前化疗影响人腺上皮肿瘤组织中Syk表达的机制研究一、syk在乳腺癌组织中失活的甲基化机制探讨目的:探讨syk mRNA在乳腺癌中失活的甲基化机制。方法:应用甲基化特异性PCR（MSP）方法检测30例乳腺癌癌组织中syk基因启动子区CpG岛甲基化改变的特点与临床病理特征的关系。结果:30例正常乳腺腺组织中均未发现甲基化,而在30例乳腺癌组织中17例发生甲基化,正常乳腺组织、癌组织甲基化发生率（0: 56.7%）之间有显著性差异（P<0.001）。III期患者syk基因启动子甲基化率41.6%明显高于II期患者的22.2%（P<0.001）。syk基因启动子区甲基化与临床TNM分期正相关,而与患者肿瘤分化程度、肿瘤大小和肿瘤部位无明显相关性。结论:启动子区甲基化可能是导致乳腺癌组织中syk失活的原因之一。二、乳腺癌患者洛铂术前化疗后术前化疗后syk在乳腺癌组织中表达增强的机制探讨目的:探讨sykmRNA在乳腺癌患者洛铂术前化疗后,肿瘤组织Syk表达增强的分子机制。方法:应用免疫组织化学染色法分别检测30例未行化疗乳腺癌患者、20例术前化疗后乳腺癌患者癌组织标本中和Syk、IL-2Rβ、CD4和c-myc的表达及其相互之间的关系。结果:20例乳腺癌患者术前化疗后肿瘤组织中Syk、IL-2Rβ、CD4和c-myc均表达增强,Syk和c-myc阳性表达率分别为86.7%、70%,较对照组的阳性表达率（63.3%、52.8%）明显增高（P<0.05）;而IL-2Rβ和CD4在两组之间无显著性差异（P>0.05）。结论: syk基因启动子区甲基化可能是导致乳腺癌组织中syk失活的原因之一。术前化疗后可增强肿瘤组织中Syk和c-myc的表达增强,发挥抑制肿瘤生长的作用。