目的:根据贵州省手足口病(hand,foot and mouth disease,HFMD)患儿肠道病毒71型(enterovirus 71,EV71)分离株的病毒蛋白1(Viral Protein 1,VP1)结构序列研制多肽疫苗(epitope peptide vaccine,EPV)并研究其对小鼠的免疫保护作用。方法:选取2013年3月1日至2015年12月31日从贵州省HFMD患儿的咽拭子样本中分离到17株EV71毒株,其VP1氨基酸(Amino Acid,AA)序列一致(共297个AA),据此设计并合成多肽片段(一段为27个AA外,其余均为20个AA);用EV71感染HFMD病愈患儿的阳性血清,通过间接酶联免疫吸附测定(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)法筛选出免疫原性较好的多肽片段,制成EPV;将EPV免疫无特定病原体(Specific Pathogen Free,SPF)健康雌鼠,并设注射佐剂的对照组;将雌鼠的子代小鼠随机分为注射和不注射EV71病毒颗粒的2个亚组;注射2天后处死小鼠,分别取小鼠的骨骼肌、小肠和脑组织,通过逆转录聚合酶链式反应(Reverse Transcription Polymerase Chain Reaction,RT-PCR)检测病毒感染情况,同时苏木精-伊红(Hematoxylin-Eosin,HE)染色后显微镜下观察病理改变。结果:共设计并合成了19段含交叉序列的多肽片段,从中筛选出了3段免疫原性较好的多肽片段(P2:VSRALTHALPAPTGQNTQVS;P4:ALQAAEIGASSNA SDESMIE;P8:YANWDIDITGYAQMRRKVEL),制成了3种EPV并成功免疫雌鼠,取雌鼠的子代小鼠进行后续试验。RT-PCR结果显示,各感染病毒亚组的骨骼肌、小肠和脑组织中均能检测到EV71病毒,而未感染病毒亚组均检测不到。病理结果显示,接种佐剂母鼠的子代小鼠在感染EV71病毒后,骨骼肌、小肠和脑组织均出现明显的炎性改变;接种EPV母鼠的子代小鼠骨骼肌、小肠和脑组织的炎性改变明显减轻,3种EPV对EV71所致炎症的改善作用无明显差异;接种EPV母鼠的未注射病毒亚组子代小鼠骨骼肌、小肠和脑组织中均未检测到EV71病毒,也未观察到明显的炎性改变。结论:制备所得的3种VP1抗原表位EPV均具有良好的抗原性,通过免疫母鼠均能对小鼠产生较好的免疫保护作用,成功创建了一种新型的EV71 VP1抗原表位EPV。