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目的：设计合成雌酮(ES)靶向片段DSPE-PEG2000-ES，构建长循环培美曲塞(Pemetrexed, PEM)脂质体ES-SSL-PEM，对其制备条件进行优化并表征，同时对其生物相容性进行研究，并以ER表达阳性肿瘤细胞A549作为研究对象，进行体外抗肿瘤作用的研究。
方法：1.DSPE-PEG2000-ES的合成：利用两步化学反应首先将ES与SAA通过氧化反应生成羧酸化雌酮ES-COOH，然后与DSPE-PEG2000-NH2分子发生酰胺偶联，产生靶向于ER的靶向片段DSPE-PEG2000-ES。ES-COOH和DSPE-PEG2000-ES均采用核磁共振谱检测进行结构鉴定；
2.ES-SSL-PEM的制备和表征研究：采用薄膜分散法制备PEM脂质体，从磷脂胆固醇比、水化温度、药脂比等影响因素研究反应条件对脂质体制备的影响，确证最佳处方和工艺的可行性；应用电镜观察脂质体表观形态，纳米粒度分析仪检测脂质体粒径和Zeta电位情况，紫外分光光度法(UV)检测脂质体的载药率、包封率、体外释放等。
3.ES-SSL-PEM生物相容性研究：用MTT法检测ES-SSL-PEM对血管内皮细胞(ECs细胞)的细胞毒性作用。同时，检测PEM脂质体制剂对BSA的吸附作用，溶血实验检测不同浓度ES-SSL-PEM的溶血率。
4.ES-SSL-PEM体外抗肿瘤作用研究：选取ER过表达的肺癌细胞A549和乳腺癌细胞MCF-7，采用MTT法观察游离PEM和SSL-PEM、ES-SSL-PEM对其的增殖抑制作用，并通过划痕实验验证药物对A549细胞迁移运动能力的抑制作用。
通过红外图谱和核磁图谱的数据分析，确证了ES-COOH和DSPE-PEG2000-ES的成功合成，薄膜分散法制备脂质体，通过单因素实验得出当PC和Chol比例为6∶1，水化温度为37℃，药脂比为1∶4时，可制备优化后PEM脂质体，其分布均匀，粒径为149.8±2.49，Zeta电位为-18.3±0.74mv，DL为6.13±0.287%，EE为52.3±0.99%。体外释放和稳定性研究结果表明ES-SSL-PEM在2-8℃时保存12天粒径与Zeta电位无明显变化，稳定性较好，在37℃恒温震荡器中ES-SSL-PEM在24h后的药物释放率为68.3±3.3%；MTT结果证明ES-SSL-PEM对正常细胞ECs增殖活性影响较小，高浓度下细胞存活率不低于90%，蛋白吸附实验显示ES-SSL-PEM处理组的BSA吸附率较低，且随时间的影响低于游离PEM组，溶血实验显示ES-SSL-PEM在不同浓度范围内溶血率均小于5%。体外抗肿瘤作用研究显示ES-SSL-PEM对A549细胞和MCF-7细胞的增殖抑制能力较强且呈浓度依赖性；细胞划痕实验显示ES-SSL-PEM对A549细胞较游离的PEM有较好的抑制迁移作用。
结论：综上所述，本课题成功制备了一种ES修饰的PEM长循环脂质体新制剂ES-SSL-PEM，其粒径均一，且稳定性好，经体外抗肿瘤活性研究表明其对肺癌细胞A549和乳腺癌细胞MCF-7具有较好抑制作用，强于游离PEM，是一种主动靶向ER高表达肿瘤细胞的PEM 载药系统，为PEM对肿瘤的治疗提供了新的实验数据，具有潜在的临床应用价值。
方法：1.DSPE-PEG2000-ES的合成：利用两步化学反应首先将ES与SAA通过氧化反应生成羧酸化雌酮ES-COOH，然后与DSPE-PEG2000-NH2分子发生酰胺偶联，产生靶向于ER的靶向片段DSPE-PEG2000-ES。ES-COOH和DSPE-PEG2000-ES均采用核磁共振谱检测进行结构鉴定；
2.ES-SSL-PEM的制备和表征研究：采用薄膜分散法制备PEM脂质体，从磷脂胆固醇比、水化温度、药脂比等影响因素研究反应条件对脂质体制备的影响，确证最佳处方和工艺的可行性；应用电镜观察脂质体表观形态，纳米粒度分析仪检测脂质体粒径和Zeta电位情况，紫外分光光度法(UV)检测脂质体的载药率、包封率、体外释放等。
3.ES-SSL-PEM生物相容性研究：用MTT法检测ES-SSL-PEM对血管内皮细胞(ECs细胞)的细胞毒性作用。同时，检测PEM脂质体制剂对BSA的吸附作用，溶血实验检测不同浓度ES-SSL-PEM的溶血率。
4.ES-SSL-PEM体外抗肿瘤作用研究：选取ER过表达的肺癌细胞A549和乳腺癌细胞MCF-7，采用MTT法观察游离PEM和SSL-PEM、ES-SSL-PEM对其的增殖抑制作用，并通过划痕实验验证药物对A549细胞迁移运动能力的抑制作用。
通过红外图谱和核磁图谱的数据分析，确证了ES-COOH和DSPE-PEG2000-ES的成功合成，薄膜分散法制备脂质体，通过单因素实验得出当PC和Chol比例为6∶1，水化温度为37℃，药脂比为1∶4时，可制备优化后PEM脂质体，其分布均匀，粒径为149.8±2.49，Zeta电位为-18.3±0.74mv，DL为6.13±0.287%，EE为52.3±0.99%。体外释放和稳定性研究结果表明ES-SSL-PEM在2-8℃时保存12天粒径与Zeta电位无明显变化，稳定性较好，在37℃恒温震荡器中ES-SSL-PEM在24h后的药物释放率为68.3±3.3%；MTT结果证明ES-SSL-PEM对正常细胞ECs增殖活性影响较小，高浓度下细胞存活率不低于90%，蛋白吸附实验显示ES-SSL-PEM处理组的BSA吸附率较低，且随时间的影响低于游离PEM组，溶血实验显示ES-SSL-PEM在不同浓度范围内溶血率均小于5%。体外抗肿瘤作用研究显示ES-SSL-PEM对A549细胞和MCF-7细胞的增殖抑制能力较强且呈浓度依赖性；细胞划痕实验显示ES-SSL-PEM对A549细胞较游离的PEM有较好的抑制迁移作用。
结论：综上所述，本课题成功制备了一种ES修饰的PEM长循环脂质体新制剂ES-SSL-PEM，其粒径均一，且稳定性好，经体外抗肿瘤活性研究表明其对肺癌细胞A549和乳腺癌细胞MCF-7具有较好抑制作用，强于游离PEM，是一种主动靶向ER高表达肿瘤细胞的PEM 载药系统，为PEM对肿瘤的治疗提供了新的实验数据，具有潜在的临床应用价值。