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目的：比较周围神经系统脱髓鞘性疾病[包括Guilain-Barre Syndrome(GBS)和慢性炎症性脱髓鞘性多发性神经病(CIDP)]患者与健康对照者(healthy controls,HCs)外周血CD4+CD25+调节性T细胞(CD4+CD25+Tregs)数量、免疫抑制功能的变化,探讨CD4+CD25+Tregs参与周围神经系统脱髓鞘性疾病发病的可能机制。
方法：(1) 流式细胞技术检测35例GBS[21例急性运动轴索型神经病(AMAN)和14例急性炎症性脱髓鞘性多发性神经病(AIDP)],15例CIDP患者和25例HCs外周血CD4+CD25+Tregs的数量及CD4+CD25+Tregs表面分子CTLA-4、CD45RO的表达。(2)磁性活化细胞分选法(Magnetically activated cell sorting,MACS)纯化患者与HCs外周血单个核细胞(mononuclear cells,MNC)中CD4+CD25+Tregs和CD4+CD25-T细胞。(3)采用共同培养方法检测患者与HCs外周血CD4+CD25+Tregs的免疫抑制功能的变化。(4)采用酶联免疫吸附试验(ELISA)测定上清液中细胞因子INF-γ的含量。(5)实时荧光定量聚合酶链反应(real-time fluorescentquantitative PCR RT-FQ-PCR)检测患者与HCs外周血CD4+CD25+Tregs中FoxP3mRNA和LAG-3 mRNA的表达。
结果：(1) GBS和CIDP患者外周血CD4+CD25+Tregs数量较Hcs显著降低(p<0.01);经过标准的免疫球蛋白治疗后,随着病情的好转GBS患者外周血 CD4+CD25+Tregs数量明显回升,且逐渐接近正常。(2)GBS和CIDP患者外周血中的CD4+CD25+Tregs的CD45RO、CTLA-4表达与HCs比较无显著性差异(p>0.05)。(3)外周血MNC经过MACS法分选纯化后,CD4+CD25-T细胞纯度在93％-97％,CD4+CD25+Tregs纯度在90％-95％,达到进行细胞共同培养实验的要求。(4)混合淋巴细胞共同培养结果显示,GBS患者与HCs组外周血中的CD4+CD25+Tregs能够有效的抑制CD4+CD25-的增值,与HCs组比较无显著性差异(p＞0.05);而CIDP患者外周血CD4+CD25+Tregs抑制功能显著降低,与HCs组比较有显著性差异(p<0.01)。(5)与HCs组比较,GBS患者外周血CD4+CD25+Tregs与CD4+CD25-T以1:1比率共同培养后上清液中的INF-γ的含量无明显变化(p>0.05);而CIDP患者外周血CD4+CD25+Tregs与CD4+CD25-T共同培养后上清液中的INF-γ的含量显著增加(p<0.01)：(6)GBS患者外周血CD4+CD25+Tregs中FoxP3 mRNA和LAG-3 mRNA的相对表达含量未发生变化,与HCs组比较无显著性差异(p>0.05);而CIDP患者外周血CD4+CD25+Tregs FoxP3mRNA和LAG-3 mRNA的相对表达量显著降低,与HCs组比较有显著性差异(p<0.01)。
结论：(1)周围神经系统脱髓鞘疾病的发生机制可能与患者外周血中CD4+CD25+Tregs的数量和/或功能变化有关。CD4+CD25+Tregs的数量和/或功能变化可能与疾病的状态相关；在不同疾病或同一疾病的不同阶段CD4+CD25+Tregs的数量和/或功能变化不同。(2)GBS患者外周血中CD4+CD25+Tregs的数量在急性期短时间内急剧减少可能与GBS的发病机理相关。可恢复的CD4+CD25+Tregs细胞数量及其不变的抑制功能可能对GBS的单相病程至关重要。(3)复发期和进展期的CIDP患者外周血CD4+CD25+Tregs的数量和抑制功能的改变可能与其病程的复发性和慢性迁延性相关。(4)外周血中CD4+CD25+Tregs的FoxP3和LAG-3基因在mRNA转录水平的表达量可能与CD4+CD25+Tregs免疫抑制功能密切相关。