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蛛网膜下腔出血(Subarachnoid hemorrhage，SAH)是一种十分凶险的神经外科急症，有着高死亡率和高致残率。传统观点认为，SAH后发生的大血管痉挛是导致SAH预后不良的关键因素。随着研究的深入，越来越多的证据表明血管痉挛对SAH的预后影响较小。近年来，针对早期脑损伤（early brain injury,EBI）的研究逐渐深入，人们发现干预EBI对于SAH预后有着良好的效果。EBI是指SAH发生后72h内的直接脑损伤和继发病理生理变化，包括血脑屏障的破坏、离子稳态失衡、脑缺血、脑水肿、自噬和凋亡等。最近，有人报道了一种细胞死亡机制，称为坏死性凋亡，也在EBI中发挥重要作用。这是一种非caspase依赖性的细胞程序性死亡，在多种病理生理过程中存在，其中就包括SAH。Necrostatin-1（nec-1）是一种特异的坏死性凋亡抑制剂，可以减轻SAH后的大脑损伤。然而，nec-1对SAH后海马神经元的影响及其对突触的保护作用及其机制尚不清楚，对于SAH后行为学的改变也尚待研究。 目的： 目前的研究旨在探究nec-1对SAH后EBI中海马突触的保护作用及其相关信号通路的影响。 方法： 1.将159只大鼠随机分为3组，分别进行三部分实验:第一组实验大鼠用于探究SAH后坏死性凋亡水平的变化;第二组大鼠用于探究nec-1对海马的保护作用，通过苏木素伊红染色等方法观察大鼠海马形态学变化，通过透射电镜观察突触的超微结构;第三组大鼠用于探究nec-1与CREB-BDNF通路的关系。 2.使用枕大池注血法制备大鼠SAH模型。在SAH造模后通过脑室内注射给予nec-1。 3.在SAH后24h后，使用蛋白质印迹(western blotting)和免疫荧光检测坏死样凋亡的两项主要指标受体相互作用蛋白激酶1(Receptor Interacting Protein Kinases1，RIP1)和受体相互作用蛋白激酶3(Receptor Interacting Protein Kinases3,RIP3)。 3.在SAH发生后24h检测到火鼠神经行为评分和脑水肿程度。 4.H&E染色，尼氏染色，银染色和末端脱氧核苷酸转移酶dUTP缺口末端标记(terminal deoxynucleotidyl transferase dUTP nick end labeling,TUNEL)用于观察海马的形态学变化。 5.使用western blotting检测突触相关蛋白的损伤，通过透射电镜观察突触的超微结构，评估SAH对突触的影响以及nec-1对SAH后突触的保护作用。 6.Western blotting用于检测cAMP反应元件结合蛋白(CREB)和脑源性神经营养因子(BDNF)两种蛋白的表达。此外，通过透射电子显微镜(TEM)和TUNEL染色观察nec-1在特异性CREB抑制剂应用时的作用，以此判断nec-1的作用和CREB-BDNF通路的关系。 结果： 1.在SAH组中，RIP1和RIP3蛋白在海马中表达显着增加，而nec-1的处理可以降低RIP1和RIP3蛋白的表达。 2.SAH能够明显诱导大鼠发生脑水肿，使大鼠神经行为评分恶化。与SAH组相比，注射nec-1能够有效减轻脑水肿并改善神经行为评分。 3.与Sham组相比，SAH组海马神经元数目减少，凋亡细胞增多，海马结构遭到很大程度的破坏。应用nec-1后，神经元数目有所增加，凋亡细胞减少，海马结构相对改善。 4.根据TEM图像，Sham组海马处突触结构正常，突触前膜、突触后膜以及突触间隙清晰可见，突触前膜附近可见大量囊泡。SAH发生后，突触结构有着很大程度的破坏，大量电子致密物在突触沉积。与SAH组相比，SAH+nec-1组突触损伤得到缓解。 5.SAH发生后，突触相关蛋白表达减少。与SAH组对比，nec-1的处理可以增加突触蛋白的表达。 6.SAH组中磷酸化CREB和BDNF的表达明显降低。与SAH组相比，Nec-1的治疗显著增加磷酸化CREB和BDNF蛋白的水平。在应用CREB特异性抑制剂666-15后，海马神经元凋亡增加，突触结构破坏加重，nec-1的保护作用被抑制剂阻碍。 结论： 在本研究中，发现SAH能够诱导大鼠海马的坏死性凋亡。坏死性凋亡抑制剂nec-1能够改善大鼠SAH后的脑水肿、改善神经行为评分，同时改善海马的形态学结构，减轻突触损伤。CREB-BDNF通路可能是nec-1发挥神经保护作用的一种潜在途径。