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目的:研究食管鳞癌Eca109细胞中,Survivin是否参与TNF-α诱导PD-L1表达增高,初步确定与PD-L1表达相关的信号通路;明确以上信号通路蛋白细胞外泌体中含量的变化。方法:1)选用肿瘤坏死因子α(TNF-α)诱导食管鳞癌细胞Eca109,使PD-L1表达增高;2)通过ERK、MEK、JNK、PI3K/AKT、STAT3、PKA、PKC、Hedgehog、CaMK2信号通路抑制剂SCH772984、PD98059、SP600125、LY294002、AG490、H89、Staurosporine、Vismodegib、KN62干预Eca109细胞1.5、3、6、12、24小时,筛选TNF-α诱导PD-L1高表达的主要细胞内信号传导通路;3)使用Flag-Survivin过表达载体、Survivin的抑制剂YM155及筛选的主要信号传导通路抑制剂对Eca109细胞进行干预3、12、24小时;4)收集不同处理组中的细胞培养基上清,采用超高速离心法提取外泌体。本实验中选用免疫印迹Western blot蛋白电泳方法检测抑制剂干预后相关信号通路的相关基因ERK、MEK、JNK、PI3K/AKT、p-STAT3、PKA、PKC、Hedgehog、CaMK2、PD-L1、Survivin在蛋白水平上的表达变化情况;使用流式细胞仪检测凋亡的变化情况;选用超高速梯度离心提取不同处理组细胞培养基的外泌体并进行电镜和Western blot鉴定。结果:1)TNF-α诱导Eca109细胞1.5、3、6、12、24小时后,Western blot检测结果显示,PD-L1蛋白表达量呈现升高的趋势,TNF-α能够诱导Eca109细胞PD-L1表达增高;2)在ERK、MEK、JNK、PI3K/AKT、STAT3、PKA、PKC、Hedgehog、CaMK2九条信号通路中,只有使用STAT3信号通路的抑制剂AG490,p-STAT3、Survivin和PD-L1表达量均下调,STAT3、PD-L1与Survivin存在协同效应;3)转染Flag-Survivin载体的Eca109细胞中,STAT3/PD-L1信号通路随Survivin表达升高而上调;Survivin特异性抑制剂YM155,均抑制了Survivin以及STAT3、PD-L1的表达,且同时使用YM155和AG490两种抑制剂的抑制效果更明显;4)AG490抑制STAT3和PD-L1的表达,并造成食管鳞癌细胞晚期凋亡率增高;5)细胞培养基上清所提取外泌体中Survivin和PD-L1的量较少,且各组间没有差异。结论:在食管鳞癌Eca109细胞中STAT3是TNF-α诱导PD-L1高表达的主要细胞内信号传导通路,Survivin与STAT3在调控PD-L1表达中具有协同效应,在Eca109细胞中存在STAT3/Survivin/PD-L1通路。