【摘 要】
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DNA甲基转移酶（methyltransferases,MTase）活性大小能够影响基因转录、细胞增殖和细胞老化等过程,其活性异常可导致人类疾病如肿瘤等的发生,因此,发展简便、快速、灵敏的DNA甲
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DNA甲基转移酶（methyltransferases,MTase）活性大小能够影响基因转录、细胞增殖和细胞老化等过程,其活性异常可导致人类疾病如肿瘤等的发生,因此,发展简便、快速、灵敏的DNA甲基转移酶活性分析方法对肿瘤的诊断（预诊）和治疗及抗肿瘤药物的筛选有着非常重要的意义。本论文构建了多种生物传感体系用于检测DNA甲基转移酶活性,具体开展了如下几项研究内容:1、结合链循环和Au NPs放大技术,构建了一种表面等离子体共振（SPR）传感体系用于检测M.Sss I活性。实验以精心设计的发夹DNA（HP1）为甲基化底物,通过一系列酶切反应,将Au NPs最终修饰到传感芯片上。由于Au NPs的共振耦合效应,能产生较强的SPR信号,从而实现不同SPR信号对不同浓度的M.Sss I的响应。本方法对M.Sss I响应的线性范围为0.5-50 U/m L,检测限为0.12U/m L。该传感器对检测目标具有良好的选择性。因此,这种SPR传感器将为检测M.Sss I活性提供一个简单、高灵敏度和高选择性的平台。2、基于闭合/张开发夹DNA-Au NPs与氧化石墨烯（GO）结合能力的差异构建检测M.Sss I活性的比色传感体系。实验结果表明,当M.Sss I浓度在0.2-60 U/m L范围内,吸光度A值与log CM.Sss I呈良好的线性相关,检测限为0.067 U/m L。与文献报道的M.Sss I传感器相比,该体系没有异常复杂的DNA设计,避免了昂贵的分子标记,实验步骤比较简单,使用廉价易得的实验仪器,该方法有利于大批量实际样品中M.Sss I含量的检测。实验结果表明该传感体系具有重复性好,灵敏度高和选择性强等优势。3、基于聚合和剪切耦合反应,构建了一种放大荧光传感体系用于灵敏检测Dam活性。实验的巧妙之处在于含有序列“GATC”的s1自杂交形成能被Dam和Dpn I特异性识别剪切的s1-s1双链体,剪切后的产物与s2杂交形成复制模板链,然后在聚合酶和对应剪切酶作用下发生放大反应,产生大量的单链b。b与修饰了发光基团和淬灭基团的发夹DNA（MB）反应使其开环并产生荧光。在此系统中,荧光强度随着Dam的浓度增大而增强,荧光强度与log CDam呈良好的线性相关。本实验方法对Dam响应的线性范围为0.001-100 U/m L,最低检测限为3.2×10-4U/m L。
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