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丙型肝炎病毒是丙型肝炎的病原体,可导致慢性肝炎、肝硬化,部分可发展成肝癌。目前较为认可的治疗方案是干扰素联合利巴韦林,但它的副作用较大,花费较高,持续应答率较低。因此,寻找更为有效的抗HCV治疗方法迫在眉睫。由于HCV在体内复制水平低,难以建立一个令人满意的高效体外复制、感染模型。因此,对HCV生活周期以及其内部基因表达调控的研究显得非常重要。本课题在研究HCV NS3解旋酶对HCV IRES的翻译启动活性的影响,并试图探讨HCV翻译自身调控的机制。方法：(1)构建HCV NS3全长和HCV NS3解旋酶表达质粒；构建HCV NS3解旋酶的突变型及其表达缺陷质粒；(2)以HCV IRES调控荧光素酶表达的质粒pCMVNCRLuc转染293T细胞模型作为研究体系,利用磷酸钙转染方法,将构建的质粒转染到该细胞中,转染24h后检测荧光素酶表达活性；(3)提取细胞RNA,RT-PCR检测pCMVNCRLuc、细胞IFN-p和PKR的mRNA的相对表达。结果：(1)质粒酶切鉴定和测序结果证明正确构建了HCV NS3解旋酶及其突变型和表达缺陷质粒；(2)体外细胞转染,HCV NS3解旋酶及其突变型表达质粒均可抑制转染细胞的荧光素酶表达,HCV NS3解旋酶表达缺陷质粒同样可抑制转染细胞的荧光素酶活性；(3)RT-PCR检测显示,转染细胞中质粒pCMVNCRLuc和转染内参质粒pRL-TK mRNA的相对表达水平无显著性差异；细胞中未检测出IFN-β表达,PKR mRNA的相对表达水平无显著性差异。结论：(1)成功构建了HCV NS3解旋酶及其突变型以及表达缺陷真核表达质粒；(2)HCV NS3解旋酶RNA可抑制HCV IRES的翻译启动活性；(3)HCV NS3解旋酶RNA对HCV IRES翻译启动活性的抑制不是通过提高PKR的表达水平发挥作用,具体机制有待进一步研究。图15幅,表3个,参考文献37篇