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目的研究人脐带间充质干细胞条件培养基(human umbilical cord mesenchymal stem cells conditioned medium,hUC-MSCs-CM)和自噬抑制剂3-MA对接受10Gy辐射后小胶质细胞自噬和凋亡以及炎症反应的影响,为放射性脑损伤的防治提供新思路。方法1采用酶消化法分离培养hUC-MSCs,倒置显微镜下观察细胞形态,流式细胞仪鉴定细胞表型。选取对数期生长良好的第3～4代hUC-MSCs用无血清的IMEM培养基培养48h,收集上清制备hUC-MSCs-CM备用。2采用6MV-XRay直线加速器10Gy照射BV2小胶质细胞建立辐射细胞模型,hUC-MSCs-CM和3-MA进行干预。3实验共分5组:A空白对照组(Control组);B单纯接受10Gy电离辐射组(RT组);C 10Gy+hUC-MSCs-CM共刺激组(MSCs组);D10Gy+3-MA共刺激组(3-MA组);E 10Gy+3-MA+hUC-MSCs-CM共刺激组(MSCs+3-MA组)。4 CCK-8法检测各实验组BV2小胶质细胞增殖情况;采用Annexin V/PI双染色法流式细胞仪检测各组细胞凋亡率;TUNEL联合免疫组化检测BV2小胶质细胞凋亡;Western blot检测Cleavedcaspase-3蛋白的表达;收集培养上清,提取总蛋白以及RNA;实时荧光定量PCR(RT-PCR)检测Beclin1的表达;用Western blot法检测自噬相关的蛋白LC3表达量;用ELISA方法检测上清中TNF-α、IL-1β浓度。结果1 CCK-8结果:与Control组相比,RT组BV2细胞的增殖增加(P<0.05);与RT组相比,MSCs组、3-MA和MSCs+3-MA组的BV2细胞增值降低(P<0.05)。2流式细胞仪检测、TUNEL检测以及Cleavedcaspase-3结果显示:与Control组相比,RT组BV2细胞凋亡增加,Cleavedcaspase-3表达增加(P<0.05);与RT组相比,MSCs和3-MA组BV2细胞凋亡降低,Cleavedcaspase-3表达减少(P<0.05);与MSCs和3-MA组相比,MSCs+3-MA组BV2细胞的凋亡降低,Cleavedcaspase-3表达减少(P<0.05)。3自噬相关蛋白和自噬活度结果显示:与Control组相比,RT组BV2细胞Beclin1和LC3II/LC3I表达增强(P<0.05);与RT组相比,MSCs和3-MA组BV2细胞Beclin1和LC3II/LC3I表达降低(P<0.05);与MSCs和3-MA组相比,MSCs+3-MA组BV2细胞Beclin1和LC3II/LC3I表达减低(P<0.05)。4与Control组相比,RT组BV2细胞TNF-α、IL-1β分泌增加(P<0.05);与RT组相比,MSCs和3-MA组BV2细胞TNF-α、IL-1β分泌降低(P<0.05);与MSC和3-MA组相比,MSCs+3-MA组BV2细胞的TNF-α、IL-1β降低(P<0.05)。结论1 10Gy电离辐射促进小胶质细胞的增殖和凋亡,hUC-MSCs-CM和(或)3-MA可抑制其增殖和凋亡。2 hUC-MSCs-CM和(或)3-MA可抑制电离辐射后的小胶质细胞的过度自噬,并可以减少炎症因子的分泌,且hUC-MSCs-CM和3-MA之间发挥联合作用。图8幅;表9个;参134篇。