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目的:观察化瘀解毒中药对宫内感染致早产脑损伤仔鼠脑组织中肿瘤坏死因子(TNF-α)和胶质纤维酸性蛋白GFAP表达影响,探讨化瘀解毒法改善宫内感染致早产脑损伤的机制,提出宫内感染所致脑瘫的中医药治疗可以从毒、瘀论治的新理论。
方法:(1)动物模型制各:12只孕第16天的脂多糖(LPS)组大鼠予LPS450μg/kg d,连续两天腹腔注射,8只生理盐水组孕鼠腹腔注射同剂量的生理盐水。孕22天前分娩的仔鼠为早产仔鼠。记录两组孕鼠的分娩时间及新生仔鼠的出生体重。仔鼠出生后即刻随机选LPS组和对照组孕鼠各2只取子宫和胎盘HE染色观察宫内感染情况,判断标准为大量中性粒细胞浸润。随机选LPS组和对照组仔鼠各8只断头取脑HE染色,观察脑室旁白质损伤情况。(2)随机选取生理盐水组足月产仔鼠8只作为空白对照组(A)和LPS组早产仔鼠24只。LPS组仔鼠随机分为3组,每组8只,分别为:血必净高剂量组(B),血必净低剂量组(C),模型组(D)。四组大鼠恒温恒湿,母乳喂养,7日龄时B组予血必净注射液8ml/kg·d腹腔注射,C组4ml/kg·d腹腔注射,A组与D组予生理盐水4ml/kg·d腹腔注射,共14天。(3)21日龄时对四组大鼠进行神经行为学检测(采用悬吊试验),并取脑组织应用免疫组化方法对OFAP、TNF-α进行测定。
结果:(1)LPS组中8只孕鼠提前分娩,1只孕鼠分娩前死亡,共娩出早产仔鼠45只,死产仔鼠17只,余3只足月顺利生产,共娩出足月仔鼠23只,无死产仔鼠:对照组孕鼠均足月顺利生产,孕鼠无提前分娩及死亡,共娩出活产足月仔鼠65只;与对照组仔鼠相比,LPS组仔鼠出生时皮肤颜色紫绀、体重低、活动少;LPS组子宫及胎盘病理HE染色见大量中性粒细胞浸润,说明模型组孕鼠存在宫内感染;LPS组仔鼠脑组织白质结构稀疏,胶质细胞聚集,可见出血改变。(2)模型组仔鼠反应迟钝、稳定性差,悬吊时肢体自主活动明显减少,下肢易颤抖,掉落到桌上;空白对照组大鼠反应快,动作灵活、准确,在玻璃棒上可自由运动,甚至可翻上玻璃棒并且沿玻璃棒爬行,与模型组比较差异有极显著意义(P<0.01);血必净高组和低组干预治疗后行为改善情况介于模型组与空白对照组之间(P<0.05),说明血必净高、低剂量组可使宫内感染致早产脑损伤仔鼠在行为学方面得到改善。血必净高、低剂量干预治疗的两组之间差异无显著意义(P>0.05),说明血必净高、低剂量干预治疗改善仔鼠行为学方面作用相当。(3)化瘀解毒中药干预治疗后使宫内感染致早产脑损伤仔鼠脑组织中TNF—α表达减少而GFAP阳性表达增加。TNF-α结果:①模型组脑室旁白质TNF-α含量最高,空白对照组脑室旁白质TNF-α含量最低,两组相比差异有极显著意义(P<0.01);血必净高、低剂量组脑室旁白质中TNF-α含量近似,介于模型组和空白组之间(P<0.05),说明血必净高、低剂量组可使对脑白质具有毒性的TNF-α含量下降,防止其对脑白质的进一步损害,提示干预治疗有效。②血必净高剂量组与低剂量组相比,脑室旁白质中TNF-α含量差异无显著意义(P>0.05),说明血必净高、低剂量干预治疗的疗效基本一致。GFAP结果:①血必净高剂量组、低剂量组脑室旁白质中GFAP阳性细胞数目相近且同属最高,与空白对照组相比P<0.01,与模型组相比P<0.05,说明血必净干预治疗可使具有保护和修复作用的GFAP阳性细胞数明显增高,改善宫内感染所致的早产脑损伤,干预治疗有效。模型组介于血必净高低剂量组和空白组之间(P<0.05),说明宫内感染致早产仔鼠脑损伤后,脑室旁白质中GFAP表达反应增加。②血必净高剂量组脑室旁白质中GFAP阳性细胞均数高于低剂量组,说明血必净高剂量组疗效优于低剂量组,但经统计学处理差异无显著意义(P>0.05),可能与样本量小有关。
结论:(1)通过复制黑龙江佳木斯大学宫内感染动物模型,证实脂多糖(LPS)可以造成宫内感染引起仔鼠脑损伤,模型真实可靠。(2)化瘀解毒中药对宫内感染致早产脑损伤仔鼠脑组织中TNF—α和GFAP表达有调节作用,可明显改善宫内感染致早产脑损伤,其机制可能与降低脑组织中TNF—α和使GFAP表达升高有关。(3)毒、瘀是宫内感染所致脑瘫的主要病理因素,宫内感染所致脑瘫可用化瘀解毒法治疗。