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最近的研究显示原发性开角型青光眼(Primary open-angle glaucoma,POAG)在我国的比例正逐步增加,有些研究甚至表明高于原发性闭角型青光眼(Primary angle-closure glaucoma,PACG),这可能与诊疗水平和技术的不断提高有关。随着POAG人数的增多,因其所致的盲目的人数也会逐步增多。因而POAG的诊断和治疗具有重要的临床和社会意义。药物治疗仍然是POAG降眼压的重要手段。国内外的研究和我们临床工作中观察发现抗青光眼药物效应存在明显的个体差异,症状和病程相似的患者使用相同药物的敏感性各不相同;在药物不良反应方面,仍然有小部分患者出现严重的不良反应,导致治疗的失败,甚至危及生命。到目前为止,POAG发病原因和机理仍然不明确,病情隐匿,给诊断和治疗增加了困难,这些特点决定了POAG个体化治疗的重要性和必然性,只有实行个体化治疗,才能使每位POAG患者获得合适的、安全的治疗。单核苷酸多态(SNP)的发现和SNP数据库的建立,使个体化用药成为可能。药物基因组学为个体化药物治疗的研究提供了研究工具。对SNP的深入研究发现:药物代谢酶、药物转运体和DNA修复基因的SNP影响药物的毒性和有效性,尤其是药物代谢酶,如细胞色素氧化酶(P450),这些研究基础使SNP成为预测个体药物反应最有希望的指标。SNP在个体化药物治疗研究中的应用,如在精神病治疗学、心血管治疗学中日益广泛。眼科用药的个体化研究为数不多,尚在起步阶段。
噻吗洛尔(Timolol)作为我国治疗POAG的主要药物,存在明显的个体差异。Timolol主要由相关代谢酶CYP2D6在肝内代谢,此酶已经被证实存在高度单核苷酸多态。同时在其他医学领域,如心血管治疗学和精神病治疗学中,已经发现这些酶的基因的单核苷酸多态和药物疗效的个体差异密切相关。本课题组前期对12个P450SNP位点使用基因芯片和SNP Stream微测序方法进行筛选,初步得出CYP2D6rs16947和rs1135840可能与Timolol药物反应个体差异相关。为进一步明确CYP2D6rs16947和rs1135840与Timolol药物反应个体差异的相关性,为临床用药提供预测性的SNP指标,本次研究增加研究对象数量,扩大病人来源;改进实验方法,即利用PCR-RFLP方法进行基因分型,以进一步探讨两者之间的联系。
实验方法:
本研究共选取研究对象123例,均为POAG患者,单用0.5%Timolol滴眼液局部点眼控制眼压。提取患者的全血基因组DNA,根据前期结果选取了CYP2D6的两个SNP位点即rsl6947和rsl 135840,利用PCR.RFLP的方法分析每个患者的基因型。根据各个基因型分别分组,即rsl6947分为CC、CT、TT三组,rs1135840分为GG、GC、CC三组。记录每个研究对象用药前眼压和心率,以及用药后24小时眼压和心率,计算每个研究对象眼压下降和心率下降值。根据方差分析得到每个SNP各组间眼压下降和心率下降是否具有统计学差异和晒床差异。
实验结果:
1.Timolol药物疗效个体差异Timolol的降眼压作用在123个POAG患者中存在很大的个体差异,其最大降压幅度为23mmHg,平均8.2+6.1 mmHg。心率下降幅度0~31bpm,平均下降4.4±8.2bpm。
2.遗传平衡检验应用遗传平衡定律检测研究对象是否来自于随机人群(表6)。
3.rs16947和rs1135840基因型在POAG患者中的分布对123例POAG患者采用PCR-RFLP基因分型检测,其中CYP2D6 SNP rs16947位点123例,rs1135840位点101例。各位点基因型在POAG患者中的分布见下述。
3.1 rsl6947(2850C>T,R296C)基因频率C=0.8537(210/246),T=0.1463(36/246);
基因型频率CC=0.7317(90/123),TC=0.2439(30/123),TT=0.0244(3/123)。
3.2 rs1135840(4180C>G,S486T)基因频率G=0.3218(65/202),C=0.6782(137/202);
基因型频率GG=0.1287(13/101),GC=0.3861(39/101),CC=0.4851(49/101)。
4.使用噻吗洛尔滴眼液24小时后各基因型眼压改变比较在rs16947各基因型中,眼压下降:CC组8.5~6.1mmHg、CT组8.04±6.3mmHg、TT组3.3±1.2mmHg。三组资料用方差分析得到F值为1.092,P值为0.339,说明三组间无统计学差异。
在rs1135840各基因型中,眼压下降:GG组7.74±6.2mmHg、GC组8.5+6.5mmHg、CC组为8.04±5.8mmHg。三组资料用方差分析得到F值0.103,P值为0.903,说明三组间无统计学差异。
5.使用噻吗洛尔滴眼液24小时后各基因型心率改变比较在rs16947各基因型中,心率下降:CC组3.14±7.4次份钟、CT组为6.74±9.1次分钟、TT组13.3±7.1汐汾钟。三组资料用方差分析,得到P值为0.021,三组间有统计学差异。CC组与CT组比较P为0.043,CC组与TT组比较P为0.035,CT组与TT组比较尸为0.177。
在rs1135840各基因型中,心率下降:GG组1.34±7.0次份钟、GC组5.04±8.9次/分钟、CC组3.6±8.0/分钟。三组资料用方差分析,得到P值为0.529,说明三组间无统计学差异。
结论:
本课题组前期在国内首次研究P450 SNP与主要抗青光眼药物Timolol药物反应个体差异的相关性,得出CYP2D6 SNP rs16947(2850C>T,R296C)和CYP2D6 SNP rs1135840(4180C>G,S486T)两个SNP可能与Timolol药物疗效存在相关性。本研究在前期研究的基础上,进一步增加样本量,同时改变实验方法,得出以下结论:
1.CYP2D6 SNPrs16947(2850C>T,R296C)可能与Timolol药物疗效个体差异相关。具有CC基因型的POAG患者使用Timolol后发生心动过缓可能性小;TT基因型的POAG患者使用Timolol后发生心动过缓可能性大,同时降低眼压幅度可能小于其他基因型患者。
2.CYP2D6 SNPrs1135840(4180C>G,$486T)与Timolol药物疗效个体差异无相关性。