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人参(Panax ginseng)是一种名贵的中草药植物,具有很高的药用价值,被人们广泛应用于医疗和保健行业。经研究发现,人参的主要活性成分是人参皂苷,人参内皂苷成分种类繁多,不同的人参皂苷具有不同的药理活性,尤其是一些稀有的人参皂苷与比较常见的天然皂苷相比具有更好的药理活性,但由于其在天然皂苷中含量极少,难以大量制备,因此通过采用转化的方法手段来获得稀有皂苷已逐渐成为一种发展趋势。人参皂苷Re作为一种最常见的皂苷,在人参中含量较高,容易获取。本文利用酶法转化人参皂苷Re,为富集和制备具有较高药理活性的稀有人参皂苷提供了新的思路和方法。目的:本文在实验室研究的基础上,采用酶法降解人参皂苷Re;对降解产物皂苷Rg1和Rh1进行分离纯化并对降解产物在抗炎、APAP(对乙酰氨基酚)引起的急性肝损伤以及阿尔茨海默症活性等方面药理活性进行研究。方法:(1)人参皂苷Rg1和Rh1的制备:通过β-葡萄糖苷酶法转化转化人参皂苷Re,应用AB-8大孔树脂法、硅胶柱层析法、薄层色谱法、高效液相色谱法对人参皂苷Re的降解产物进行分离纯化与检测。(2)对AD(阿尔茨海默症)的活性研究:建立AD小鼠模型,采用避暗试验、跳台试验、Morris水迷宫试验和乙酰胆碱(Ach)试剂盒的测定,研究人参皂苷Rh1对AD小鼠模型认知障碍的改善作用。(3)抗炎活性的研究:首先建立炎症小鼠模型,然后通过二甲苯诱导的小鼠耳水肿、角叉菜胶诱导小鼠爪水肿试验、醋酸致小鼠腹腔毛细血管通透性影响和扭体试验,使用试剂盒检测小鼠血清中炎症因子肿瘤坏死因子(TNF-α)、白介素-6(IL-6)、白介素-1β(IL-1β)的表达含量,以此作为指标,探究人参皂苷Rg1和Rh1在体内的抗炎活性。(4)对APAP引起的急性肝损伤的活性研究:采用对乙酰氨基酚(APAP)建立小鼠肝损伤模型,通过试剂盒检测小鼠血清中肿瘤坏死因子(TNF-α)、白介素-1β(IL-1β)、白介素-6(IL-6)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷草转氨酶(GOT)、丙二醛(MDA)、谷丙转氨酶(GPT)的表达含量,观察肝组织病理变化,免疫蛋白分析对Bax、Bcl-2蛋白的检测,研究人参皂苷Rg1和Rh1对APAP引起的肝损伤的保护作用。结果:(1)人参皂苷Re通过酶转化法降解成单体皂苷Rg1,转化率为59.25%,提取率为11.21%;及单体皂苷Rh1,转化率为67.75%,提取率为11.73%。(2)人参皂苷Rh1可改善AD小鼠认知障碍。与阴性组相比,皂苷Rh1能够提高小鼠脑海马体中Ach的表达含量。在避暗实验中,皂苷Rh1各剂量组消退潜伏期相对提高,Rh1低剂量组消退试验潜伏期为144.5±29.3 s(P<0.05),Rh1中剂量组消退试验潜伏期为150.3±18.2 s(P<0.01),Rh1高剂量组消退试验潜伏期为132.7±22.6 s;跳台试验中,皂苷Rh1各剂量组潜伏期均有不同程度提高,Rh1低剂量组潜伏期为111.3±15.8 s,Rh1中剂量组潜伏期为132.6±36.7 s(P<0.01),Rh1高剂量组潜伏期为102.9±23.3 s;Morris水迷宫试验中,皂苷Rh1各剂量组游泳路径更为简单,找到站台的时间也相对缩短。(3)人参皂苷Rg1和Rh1可通过调节炎症因子的表达含量起到抗炎作用。皂苷Rg1和Rh1显著抑制了炎症因子TNF-α、IL-6、IL-1β的表达;可缓解小鼠爪肿胀症状,Rg1高剂量组爪肿胀抑制率为41.8%,Rh1中剂量组爪肿胀抑制率为33.5%;可缓解耳肿胀症状,Rg1高剂量组耳肿胀抑制率为57.2%,Rh1中剂量组耳肿胀抑制率为80.9%;以及可降低醋酸致小鼠腹腔毛细血管通透性的影响,Rg1高剂量组通透性抑制率为40.7%,Rh1中剂量组通透性抑制率为47.7%;且小鼠扭体次数也显著降低,Rg1高剂量组扭体反应抑制率为43.8%,Rh1中剂量组扭体反应抑制率为41.5%。(4)人参皂苷Rg1和Rh1具有改善由APAP引起的肝损伤的保护作用。与阴性组相比,皂苷Rg1和Rh1各剂量组小鼠血清中MDA含量降低,GSH、SOD活性明显增加;检测发现血清中GOT、GPT及炎症因子TNF-α、IL-6、IL-1β表达含量下降。HE染色观察到肝组织坏死面积明显减少。免疫蛋白结果显示Bax蛋白含量降低,Bcl-2蛋白含量增加。结论:人参皂苷Re可降解成单体皂苷Rg1和Rh1;人参皂苷Rh1对AD小鼠的认知障碍具有改善作用;皂苷Rg1和Rh1可对炎症反应产生一定的抑制效果;可通过抑制氧化应激、炎症反应和肝细胞凋亡,有效的抑制由APAP引起的肝损伤。