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植物经过进化形成一系列的小RNA途径参与调控植物不同的生物过程。植物内源的小RNA途径可以简单的分为两类:microRNA(miRNA)途径和smallinterfering RNA(siRNA)途径。miRNA途径已被广泛证明在植物的发育过程中扮演着非常重要的角色,最近对模式植物拟南芥,玉米和水稻的研究表明siRNA途径的一个分支trans-acting siRNA(ta-siRNA)途径也参与到植物发育的各个方面,包括叶极性模式的建成和植物顶端分生组织的形成等。
本研究通过正向遗传学的方法对豆科模式植物百脉根中ta-siRNA途径的功能进行了分析。通过EMS诱变,我们获得两个表型相似,植株形态建成受到影响的突变体reduced leafletl(rell)和rel3,其主要表型为:植株矮化多分枝、复叶和花发育缺陷以及根结瘤数目减少。图位克隆表明RELl和REL3分别和拟南芥ta-siRNA途径中的重要因子SGS3和ZIP/AGO7具有很高的同源性。和拟南芥相应突变体主要影响时期转变不同,百脉根中的这类突变体表型具有多效性,这提示ta-siRNA途径在百脉根中可能存在更广泛的发育功能。生物信息学分析和Northern杂交表明TAS3ta-siRNA在百脉根中也是保守的,并且其合成需要RELl和REL3的参与。通过对REL途径下游重要因子,TAS3ta-siRNA的靶基因AUXINRESPONSE FACTOR3(ARF3)的同源克隆发现,与拟南芥不同,百脉根中ARF3的同源基因存在多拷贝现象。这些拷贝和ARF4的同源基因都受ta-RNA途径的负调控,而且这种调控机制广泛存在于各个器官中。通过对rel突变体营养期和生殖期的基因表达谱分析发现,大量参与到激素信号转导途径中的相关基因的表达受到影响,尤其是早期生长素应答基因的表达发生了变化。综合以上结果,我们认为,在豆科百脉根中,ta-siRNA途径被整合到复叶和花发育过程中,并被招募到根瘤的发育过程中。