一、人源CENP-T-W-X-S复合物的克隆表达纯化及晶体生长　　 动粒是一种圆盘状结构，其化学本质为蛋白质。动粒作为一种非染色体性质的物质附加物，参与到与纺锤体微管的动态接触，为染色体运动提供动力，纠正着丝粒与微管间的错误接触及作为纺锤体组装检查点。与这些动粒功能相关的主要蛋白有三种，包括KNL-1/Mis12复合物/Ndc80复合物，简称为KMN。KMN复合物是通过由组成型着丝粒相关网络(CCAN)组成的动粒前体招募并完成定位的，这些组分在细胞的整个分裂周期中都是定位在染色体上的，为功能性动粒复合体的组装提供一个骨架支撑。CENP-T-W复合物之前己被证明其可特异性结合到组蛋白H3核小体，它的缺失可以导致大部分CCAN组分的丢失，因此它在动粒组装过程中发挥着一定作用。CENP-T-W复合物均包括组蛋白折叠结构域，可以与着丝粒DNA结合并定位到动粒，除此以外，CENPT还包括一个长的N端柔性区域，这个区域可以直接结合到外部动粒蛋白，但是，对于CENP-T-W复合物是如何定位到内部着丝粒我们知道的非常少。已有实验证明CENP-T-W复合物可以结合另一组组蛋白折叠结构域的蛋白即CENP-X-S复合物。CENP-X-S复合物既是一组保守的动粒蛋白，还是与范科尼贫血相关的蛋白，在细胞活动中发挥双重功能。　　 为了解释动粒蛋白CENP-T-W-X-S是如何定位到染色体的特定位置及与DNA产生稳定的接触以促进动粒的组装，我们采用原核表达系统，进行重组蛋白的表达纯化，期望得到其晶体结构。我们实验中发现四个蛋白可以形成稳定的复合物存在于溶液中，可能暗示了它们在体内发挥作用的方式。我们还对此四元复合物进行了晶体筛选，在一些条件中得到了三角形状和方状的晶体，并对相应条件进行优化以期得到质量更好的晶体。　　 二、酵母CTF3复合物的克隆表达纯化及晶体生长　　 细胞为了确保正确的染色体分离，动粒蛋白组装到着丝粒区域并与纺锤体微管接触，指引染色体运动。芽殖酵母的动粒蛋白可分为内部和外部动粒蛋白复合物，内部动粒蛋白与着丝粒DNA结合，外部动粒蛋白则是与纺锤体微管相结合的。酵母的着丝粒DNA包括三个保守的功能原件CDEⅠ、CDEⅡ和CDEⅢ，其中CDEⅢ元件可以结合纺锤体微管而且它的缺失会导致着丝粒活性的消除。内部动粒蛋白CBF3就是结合到CDEⅢ这个元件上的。Cse4p是CBF3复合物的组分，它的N端结构域可以结合到酵母外部动粒蛋白。外部动粒蛋白包括四种复合物：Ctf19/Ctf3/Ndc80/Daml。CTF3复合物含有三种蛋白组分Mcm16、Mcm22、Ctf3，它们了形成异质三联体。　　 为了了解CTF3复合物组装到内部动粒蛋白及与其他动粒蛋白组分相互作用的具体分子机制，我们采用原核表达系统，进行重组蛋白的表达纯化，期望得到晶体结构。实验中发现Mcm16、Mcm22可以形成稳定的二元复合物，可能暗示了它们在体内发挥功能的方式。我们还对此二元复合物尝试进行了晶体筛选。