酶法提取牛皮胶原多肽及其口服液的研制

来源 :宁波大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:wenhao_andy
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胶原蛋白是一种重要的功能性蛋白质,与细胞增生、分化、运动、免疫、关节润滑、伤口愈合等密切相关,直接或间接地影响着我们人体的生长、衰老以及健康等。此外,胶原蛋白由于抗原性较弱,生物相容性较好,而被广泛应用于医药、食品、日用化工、生物合成等多个工业领域,如保健品、医用胶囊、外科手术材料、食用明胶、照相明胶、化妆品等。从动物组织中提取的胶原蛋白,虽然营养十分丰富,但是其独特的三股超螺旋结构,使之性质十分稳定,不能被一般的加工工艺彻底破坏,导致其消化吸收困难,无法被人体充分利用。然而将胶原蛋白进一步水解成胶原多肽后能够显著改善其消化吸收、营养及功能特性等。所以,进一步水解胶原蛋白制备小分子肽的研究已成为胶原蛋白市场的一个热点。本文以实验室自制牛皮胶原蛋白为原料,采用复合酶酶解制备小分子胶原多肽,设计响应面试验优化了其制备工艺,并对得到的多肽混合物进行氨基酸组分分析、分离纯化和分子量分布测定。最后,利用自制得到的胶原多肽制备功能性保健品——胶原多肽口服液。本文主要研究结果如下:1、以实验室自制胶原蛋白溶液为原料,选择木瓜蛋白酶和胰蛋白酶作为复合酶,确定两种酶的添加顺序和添加比例对水解效果的影响,通过单因素和响应面试验优化胶原多肽的制备工艺,并结合实际得到复合酶水解制备胶原多肽的工艺条件为:复合酶以活力比3:1复合且同时添加,总加酶量650U/mL,酶解介质pH7.0,酶解温度50℃,酶解时间7h,在此工艺条件下得到的牛皮胶原蛋白的水解度可达到32.02%。2、采用活性炭对胶原多肽混合液进行脱色处理,以脱色率和肽损失率为指标采用单因素和正交试验得到活性炭脱色处理的工艺条件为:活性炭添加量2.0%,脱色温度30℃,脱色时间20min,此工艺下的脱色率为65.04%,肽损失率为30.37%。3、采用葡聚糖凝胶柱层析和十二烷基磺酸钠凝胶电泳(SDS-PAGE)对脱色处理后的胶原多肽混合物进行分子量分布测定和分离纯化。试验得到,胶原多肽混合物的分子量在3.0~10.0KDa,采用G-50对其进行柱层析可得到三个溶液峰,对应的分子量分别是3.0KDa,6.0KDa,10.0KDa。4、以活性炭脱色处理后的多肽溶液为原料,以感官评定为主要指标,确定胶原多肽口服液的生产工艺为:以质量体积比0.20%添加活性酵母粉,在25℃恒温箱中发酵2h;然后按2%、0.6%、0.6%和8%的添加量依次加入蜂蜜、柠檬酸、甘氨酸和白砂糖进行风味调配;再按0.06%、0.06%、0.30%依次添加黄原胶、CMC-Na和EDTA-2Na作为混合稳定剂;最后对口服液的质量指标进行检测,各项指标均符合国家标准。
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