秦皮乙素对人肝癌细胞Wnt信号通路的影响

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目的:检测秦皮乙素(Esculetin)对人肝癌细胞的增殖影响以及对Wnt通路中β-catenin、C-myc和Cyclin D1基因和蛋白的表达影响,初步探讨其抗肿瘤机制。方法:1.采用细胞病变法(Cytopathologic Effect, CPE)观察秦皮乙素对肝癌细胞SMMC-7721的抑制作用。用噻唑蓝比色法(3-(4,5-dimethyithiazol-2-yl)-2, 5-diphenyltetrazolium bromide, MTT)来测定秦皮乙素对人肝癌细胞SMMC-7721和人肝细胞HL-7702的抑制率。2.采用荧光定量PCR技术检测秦皮乙素在不同浓度,不同时间点对β-catenin、 C-myc和Cyclin D1基因合成的影响。3.通过蛋白免疫印迹法检测秦皮乙素对磷酸化β-catenin、β-catenin、C-myc和Cyclin D1蛋白表达的影响。结杲:1.秦皮乙素对人肝癌细胞SMMC-7721有增殖抑制作用,抑制效果与时间和浓度呈依赖关系。秦皮乙素与顺铂对肝癌细胞SMMC-7721的抑制率相同时,秦皮乙素对正常肝细胞HL-7702的毒性更低。2.药物作用人肝癌细胞SMMC-772148h和72h后,秦皮乙素与细胞对照组相比能显著降低β-catenin、C-myc和Cyclin D1基因的合成(P<0.05)。3.秦皮乙素作用人肝癌细胞SMMC-7721 24h后能提高P-catenin蛋白的磷酸化水平;秦皮乙素作用人肝癌细胞SMMC-7721 72h后降低了β-catenin、C-myc和Cyclin D1蛋白的表达量。结论:1.秦皮乙素对人肝癌细胞SMMC-7721有增殖抑制作用,抑制效果与时间和浓度呈依赖关系。2.秦皮乙素通过上调P-catenin蛋白的磷酸化水平,促进P-catenin的降解,抑制Wnt通路的激活。3.秦皮乙素通过下调β-catenin、C-myc和Cyclin D1基因和蛋白的表达来抑制肝癌细胞SMMC-7721的增殖。
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