论文部分内容阅读
目的通过临床观察,客观评价槐耳对哮喘缓解期儿童的干预效果;并通过体外实验,探讨槐耳改善哮喘缓解期儿童T淋巴细胞调控失衡的机理,为槐耳的进一步应用提供理论依据。方法第一部分:槐耳对哮喘缓解期儿童临床干预作用的评估将60例哮喘缓解期儿童分为2组,即对照组和槐耳组,分别给予中药调理方及中药调理方+槐杞黄颗粒,通过门诊随访的方式,观察并记录以下情况:①用药前后患儿中医证候群的累计例数;②应用ACT/C-ACT量表,每隔4周对病人进行一次哮喘控制水平评估,其时间点为首诊、第4周、第8周和第12周时。第二部分:槐耳对哮喘缓解期儿童T淋巴细胞体外干预作用的观察应用肝素抗凝管采集哮喘缓解期儿童外周血3ml,用Ficoll法分离PBMCs,均分为3组,即对照组、中剂量组和大剂量组,分别与不同浓度的槐耳菌质配液(0、3、6μg/ml)及培养液作用48小时;然后利用Real-Time PCR的方法测定细胞培养沉淀中IFN-γ,、IL-4、IL-10 mRNA的表达及T-bet、GATA-3、Foxp3 mRNA的表达,利用ELISA的方法测定细胞培养上清中IFN-γ、IL-4及IL-10的表达。统计学分析:第一部分数据为计数资料,第二部分数据以均数±标准差((?)±s)表示。采用SPSS16.0统计软件处理。P<0.05表示有统计学意义。结果第一部分:1、中医证候群的差异表达1.1在槐耳组和对照组中,治疗后患儿面色淡白、自汗、倦怠乏力、舌苔白、舌苔花剥及脉细无力的中医证候较治疗前有所改善(23vs14/21vs12,21vs11/20vs11,18vs9/15vs6等等,P值<0.05);其中,治疗后槐耳组中的自汗症状、两组中的舌苔花剥和脉细无力症状较治疗前有明显的改善(21vs11,10vs1,12vs0等等,P值<0.01)。但是,患儿纳差的中医证候在治疗前后改善不明显(12vs6,10vs4,P值>0.05)。1.2在对照组中,患儿大便干结与盗汗的中医证候在治疗前后改善不明显(13vs8,22vs15,P值>0.05);在槐耳组中,以上两个证候治疗前后有明显的改善(12vs2,19vs7,P值<0.01)。1.3在治疗前,中医证候大便干结与盗汗在槐耳组与对照组间无差异表达(12vs13,19vs22,P值>0.05);但在治疗后,大便干结与盗汗在槐耳组与对照组中的组间差异具有统计学意义(2vs8,7vs15,P值<0.05)。2、ACT/C-ACT的差异表达2.1在槐耳组,将第4周、第8周和第12周的哮喘控制测试(Asthma ControlTest,ACT)水平随访结果,分别与首诊时的ACT水平相比较,其差异表达无统计学意义P值>0.05);而在对照组,第4周与第8周的ACT水平随访结果,与首诊的ACT水平相比较,其差异表达存在统计学意义(P值<0.05)。2.2在治疗后第4周和第12周时,槐耳组与对照组的ACT水平间的差异表达无统计学意义(P值>0.05);而在治疗后第8周时,槐耳组与对照组ACT水平之间存在统计学差异(P值<0.05)。第二部分:1、T淋巴细胞相关细胞因子mRNA水平的表达:细胞沉淀中IFN-γmRNA在三组中两两组间的差异表达无统计学意义(2.21±0.26vs2.17±0.33vs2.10±0.31,P值>0.05)。IL-4 mRNA在大剂量组的表达明显低于对照组(0.86±0.13vs1.28±0.14,P值<0.01);同时,亦低于中剂量组(0.86±0.13vs1.21±0.17,P值<0.05)。IL-10 mRNA在大剂量组的表达高于对照组(2.99±0.33vs2.63±0.36,P值<0.05)。2、T淋巴细胞相关转录因子mRNA水平的表达:细胞沉淀中T-bet、Foxp3mRNA在大剂量组的表达均低于对照组(2.40±0.30vs2.63±0.25,2.31±0.31vs2.60±0.39,P值<0.05);GATA-3 mRNA在大剂量组的表达明显低于与对照组(1.56±0.22vs1.87±0.29,P值<0.01);同时,办低于中剂量组(1.56±0.22vs1.71±0.24,P值<0.05)。3、T淋巴细胞相关细胞因子蛋白水平的表达:细胞培养上清中IFN-γ、IL-10在大剂量组的表达均高于对照组(672.78±184.72vs503.74±189.78,586.47±191.83vs431.67±135.25,P值<0.05);IL-4在三组中两两组间差异表达无统计学意义(22.76±7.08vs21.17±6.84vs18.73±4.55,P值>0.05)。4、Th1/Th2细胞相关细胞因子及转录因子比值的表达:细胞沉淀中IFN-γ/IL-4 mRNA在大剂量组的表达明显高于对照组和中剂量组(2.61±0.59vs1.91±0.61,2.61±0.59vs2.00±0.62,P值<0.01);T-bet/GATA-3 mRNA在三组中两两组间差异的表达没有统计学意义(1.43±0.22vs1.52±0.22vs1.55±0.24,P值>0.05)。细胞培养上清中IFN-γ/IL-4在大剂量组的表达高于对照组(37.90±13.59vs25.62±15.28,P值<0.05)。结论1、与对照组相比较,槐耳组可有效改善中医证候群中的大便干结、盗汗两项症状;此外,在治疗后第8周的随访中发现,槐耳组在控制哮喘发作时优于对照组,以上结果提示槐耳可以对哮喘缓解期儿童进行有效的干预,从而改善患儿体质,调整肺脾肾不足,以此达到维持病情稳定的目的。2、体外实验结果显示,槐耳可上调培养上清中IFN-γ的表达,同时下调细胞沉淀中IL-4 mRNA的表达。以上结果提示槐耳可以通过上调Th1类细胞因子及下调Th2类细胞因子的途径,纠正Th1/Th2活性细胞所分泌细胞因子的偏移,从而进一步平衡Th1/Th2细胞比值的失衡。3、体外实验结果显示,槐耳可下调细胞沉淀中GATA-3 mRNA的表达,同时伴有T-bet mRNA的消耗。提示槐耳亦可通过下调Th2相关转录因子的途径,抑制Th0向Th2的分化,达到平衡Th1/Th2细胞比值的目的。4、体外实验结果显示,槐耳可上调细胞沉淀及培养上清中IL-10的表达,同时伴有Foxp3 mRNA的消耗。以上结果提示,槐耳可通过IL-10途径减轻患儿体内的慢性变应性炎症,同时也可作用于转录因子Foxp3,促进了未分化T细胞向CD4~+CD25~+Treg细胞的转化,抑制了Th2细胞的产生,调节了Th1/Th2细胞比值的失衡。