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目的：氧化应激反应一直被认为是年龄相关性黄斑变性(AMD)最常见的病因。防止视网膜色素上皮细胞的氧化损伤将有望成为AMI)的治疗方法。在此研究中,目的是研究氧化应激状态下维生素C作为抗氧化剂对视网膜色素上皮细胞的保护作用以及维生素C和SIRT1之间的调节机制。方法：1人视网膜色素上皮细胞氧化应激损伤模型的建立以及维生素C保护作用的观察。外源性过氧化氢(H202)梯度浓度作用于ARPE-19细胞,观察细胞形态变化,MTT方法检测细胞活力,2’7’-二氯荧光乙酰乙酸钠(DCFH-DA)荧光探针检测细胞内活性氧(ROS)的生成,确定H202的适合作用浓度(100μmol)。梯度浓度的维生素C作用于氧化应激下的ARPE-19细胞,检测细胞存活率、细胞凋亡和细胞内ROS的改变。2氧化应激状态下ARPE-19细胞在维生素C预处理后检测SIRT1、p53和Foxo3基因的表达。适当浓度(100μmol)的H202作用于ARPE-19细胞12小时或24小时,用梯度浓度(0μmol、20μmol、100μmol、500μmol)的维生素C预处理后,用定量即时聚合酶链反应(qRT-PCR)检测SIRT1转录因子及应激反应因子p53和Foxo3基因表达。3氧化应激状态下ARPE-19细胞在维生素C预处理后,用100mmol的白藜芦(RSV)和5mmol的烟酰胺(NA)作用于细胞。使用靶向siRNA对SIRT1进行敲除,作为阴性对照。观察RSV和NA对不同浓度梯度维生素C作用下的ARPE-19细胞的生存活力、细胞凋亡和细胞内ROS水平的影响。4Western Blot法检测在敲除或上调SIRT1表达后p53和Foxo3基因表达及蛋白表达的影响。在氧化应激状态下,用l00μmo1浓度的维生素C预处理ARPE-19细胞后用Western Blot法检测在敲除或上调SIRT1基因表达后,ARPE-19细胞p53和Foxo3基因表达以及蛋白表达的情况。结果：1外源性H202作用下,ARPE-19细胞生存力下降且呈剂量依赖性及时间依赖性,同时ARPE-19细胞内ROS水平上升,提示H202处理后可诱导ARPE-19细胞的氧化应激损伤。考虑到人体自然状态下,RPE所受到的氧化应激损伤是低强度、长时间的累积效应,所以H202的适合作用浓度确定为100μmol。维生素C处理后,中等浓度的维生素C显著提高了ARPE-19细胞氧化应激下的生存率,同时显著降低细胞内ROS水平以及细胞凋亡率。而低浓度和高浓度的维生素C无此作用。2维生素C影响SIRT1转录因子和应激反应因子(p53和Foxo3)的表达。H202可减少SIRT1的表达。当维生素C浓度达到100μmol时,不仅可显著增加SIRT1的表达,而且也显著提高了p53和Foxo3的基因表达水平。3SIRT1参与维生素C的抗氧化保护作用。SIRT1激动剂RSV不仅可显著激发维生素C的保护作用,还能使更低浓度和更高浓度维生素C具有抗氧化性能。与此同时,SIRT1抑制剂NA可减轻中等浓度维生素C的抗氧化保护作用。4氧化应激状态状态下,在敲除或上调SIRT1表达后,观察维生素C对RPE细胞p53和Foxo3基因及蛋白的表达情况。结果显示p53和Foxo3的调节异常依赖于SIRT1的调节而不是维生素C。结论：1外源性H202可诱导人视网膜色素上皮细胞ARPE-19细胞发生氧化应激反应,导致细胞损伤。适当浓度的维生素C可降低细胞内氧化应激水平,减少ARPE-19细胞损伤及凋亡,起到抗氧化损伤保护作用。2维生素C的抗氧化应激损伤的保护作用涉及SIRT1基因的调控。3联合应用维生素C和白藜芦醇(RSV)可有效抵御视网膜色素上皮细胞免受氧化应激损伤,此项研究将为维生素C和白藜芦醇(RSV)联合应用治疗AMD提供依据。