临床上因创伤、肿瘤术后、感染及先天缺陷的患者，需要大量的脂肪组织来修复软组织缺损。然而，常用的自体脂肪移植有很多的局限。脂肪组织工程是应用干细胞对软组织进行重建的一门新兴技术，干细胞和成脂因子在其中起着关键的作用。脂肪干细胞由于其来源广泛、含量丰富、取材方便、具有多向方分化潜能，已广泛应用于组织工程研究。脂肪组织不仅仅是能量存储的器官，并且能分泌大量细胞因子。我们在脂肪组织块原代法培养脂肪细胞时发现，脂肪干细胞向脂肪细胞方向分化。脂肪组织分泌物可能含有，能诱导脂肪干细胞脂向分化的成脂因子。现在研究比较成熟的体外成脂诱导因子包括：胰岛素、吲哚美辛等，对生理性成脂因子的研究较少。本课题采用组织块原代培养法获取脂肪干细胞，探索脂肪组织分泌物与成脂间的关系，及脂肪组织分泌物中可能的成脂因子。对生理性成脂因子的研究将为脂肪组织工程应用于临床奠定基础。方法：1、脂肪组织块原代培养法分离培养大鼠脂肪干细胞，采用倒置显微镜观察细胞的形态和生长状况。将原代细胞培养传代，纯化至第四代后，分别用成脂、成骨、成神经化学诱导剂进行诱导培养，然后进行油红O染色、茜素红染色及荧光免疫实验。2、脂肪组织块贴壁法收集前三天培养液作为ATE，对第四代生长状态良好的大鼠脂肪干细胞，进行诱导。而后进行油红O染色实验。3、用含有FBS和无FBS的培养基对脂肪组织块进行培养并收集ATE，分别对大鼠脂肪干细胞进行成脂诱导，进行油红O染色实验。4、收集无FBS培养基获取的ATE，分为100μg/ml、250μg/ml、500μg/ml组分，对第四代大鼠脂肪干细胞进行诱导，分别观察各诱导组成脂情况，进行油红O染色实验、成脂率检测实验，及细胞增殖和迁移实验。5、用超滤管将ATE按分子量富集为5个不同的组分，分别对第四代脂肪干细胞进行诱导，观察。并进行western blot实验，荧光免疫染色实验。6、以脂肪干细胞分泌蛋白作为对照，将脂肪组织分泌物进行质谱分析，通过信息学分析探索ATE中的成脂因子。并用western blot实验验证。结果：1、脂肪组织块法获得的细胞生长状态良好，能向脂肪细胞、成骨细胞及神经细胞系方向分化。2、ATE诱导二天时，可见个别第四代大鼠脂肪干细胞胞浆内有脂滴形成，第七天时，脂滴融合变大。阴性对照组未见脂滴形成。3、获取ATE时添加或不添加FBS，在第七天时ADSCs胞浆中均有成熟脂滴形成，两组成脂率无统计学差别(P>0.05)。4、500μg/ml组分较100μg/ml、250μg/ml组分成脂率高。不同浓度的ATE对大鼠脂肪干细胞的增殖均有抑制作用，但是各组间抑制程度相仿，无统计学意义(P<0.01)。ATE对大鼠脂肪干细胞的迁移没有影响。5、分子量>100KDa组分诱导大鼠脂肪干细胞，可见细胞脂向分化，而其它组未见成脂。western blot，荧光免疫实验结果表明分子量>100KDa诱导组细胞,成脂相关蛋白表达阳性。6、通过质谱分析找出差异表达蛋白中，分子量大于100KDa的蛋白有Col I、CP、IGg2a、FN，western bolt实验再次验证结果的可靠性。结论：1、脂肪组织块法获得的细胞有脂肪干细胞的生物学特性，具有良好的多向分化能力。2、ATE能诱导脂肪干细胞成脂分化。3、FBS对ATE获取的成脂能力无影响。4、浓度较高的500μg/ml组较浓度较低组的成脂能力更强。ATE能够抑制细胞增殖，与干细胞成脂分化机制相符，但这种抑制不是无限制的。ATE对细胞迁移无影响。5、脂肪组织块分泌物中具有成脂分化能力的因子集中在分子量>100KDa组分，为进一步研究新的生理性的成脂因子奠定了基础。6、通过我们的实验证实，Col I、CP、IGg2a、FN的确存在于脂肪组织分泌物中，其表达量及种类与单纯的脂肪干细胞分泌蛋白不同，是可能的成脂因子。