本研究针对瘤胃中复杂微生物,在前人经验基础上建立了一整套提取瘤胃微生物总DNA方法。通过多种方法的比较及优化,证明反复冻融法与珠磨仪法经过改进后提取瘤胃微生物总DNA片段基本在20kb左右,提取效率稳定,并通过真细菌、古细菌和真菌16S/18S rDNA的通用引物从所提取的瘤胃微生物总DNA中扩增出目的片段。表明这两种方法可以满足后续实验的要求。而对于超声波法与液氮研磨法提取的瘤胃微生物总DNA浓度偏低,只适应于对瘤胃微生物的简单分析研究。本研究选择瘤胃微生物中具有体表性的五种纤维分解菌脂解厌氧弧杆菌(Anaerovibrio lipolytica)、产琥珀酸丝状杆菌(Fibrobacter succinogenes)、黄色瘤胃球菌(Ruminococcus flavefaciens)、溶纤维丁酸弧菌(Butyrivibrio fibrisolven)、白色瘤胃球菌(Ruminococcus albus)为例,根据其16S rDNA的保守区的基因序列设计引物,用Real Time PCR技术,建立了对瘤胃微生物相对定量的分子生物学方法。同时,应用这些方法研究了日粮中添加豆油和胡麻油后对肉牛瘤胃微生物数量的影响。日粮中添加豆油和胡麻油后抑制了纤维分解菌的产生,其中在添加豆油组中,A. lipolyticao、F.sSuccinogene、R. flavefaciens、B. fibrisolven和R. albus采食后分别减少了54%, 42%, 52%, 65%和17%。在添加胡麻油组中,采食后分别减少了81%,43%,96%,57%和5%。从结果显示,日粮中添加胡麻油对瘤胃微生物产生的抑制作用比豆油更明显,这与胡麻油不饱和度更高有关。