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目的以糖尿病小鼠动物模型为基础进一步构建电针模型,研究电针刺激作用下糖尿病小鼠胃组织中ICC的变化。方法6-8周龄雄性C57BL/6小鼠50只,随机分为5个组:正常组(Control)、糖尿病组(DM)、糖尿病假性电针刺激组(DM+SEA)、糖尿病电刺激低频组(DM+LEA)和糖尿病电刺激高频组(DM+HEA)。利用链脲佐菌素(STZ)溶液150mg/Kg的剂量进行腹腔注射,制备糖尿病小鼠模型。电针刺激部位为小鼠双侧后肢足三里穴(ST-36)。各组刺激参数:DM+SEA组仅给予针刺,不通电流;DM+LEA组给予10Hz、连续波1-3mA电流刺激;DM+HEA组给予100Hz、连续波1-3mA电流刺激。慢性刺激,30min/天,总共刺激8周。分别在造模前1周、成模后2周、4周、6周和8周记录各组小鼠的血糖和体重的变化。8周后取各组小鼠的胃窦和胃体组织,采用新鲜组织撕片技术制备可以全层染色标本,应用免疫荧光双标技术观察ICC在各组中的变化。结果(1)造模前5个组小鼠血糖水平没有明显差异;成模后及成模后第2周、4周、6周和8周,DM组、DM+SEA组、DM+LEA组和DM+HEA组小鼠血糖水平与正常组相比显著升高,但糖尿病小鼠各组间无明显差异;(2)造模前各组小鼠体重没有明显差异;成模后第2周、4周、6周和8周,DM组、DM+SEA组、DM+LEA组和DM+HEA组小鼠体重较正常组相比都有明显下降;与DM组相比,DM+LEA组从造模后第四周开始体重下降幅度有显著差异,DM+HEA组则从造模后第八周体重下降幅度才有明显差异;(3)正常组胃窦和胃体组织中肌间和肌内都可见丰富而明亮的Ano1阳性和c-Kit阳性细胞,Ano1+细胞和c-Kit+细胞几乎可以完全重叠;与正常组相比,DM组胃窦和胃体组织肌间和肌内Ano1和c-Kit阳性细胞均显著减少,而DM+LEA组和DM+HEA组则未见明显变化;在DM组和DM+SEA组中,c-Kit较Ano1减少更明显,可见部分Ano1+c-Kitlow和Ano1+c-Kit-存在。结论:(1)电针刺激对糖尿病小鼠血糖变化无调控作用;(2)电针刺激可以减少糖尿病小鼠体重的下降幅度,尤其是DM+LEA效果更佳;(3)同c-Kit相比,Ano1在糖尿病模型中标记ICC更具敏感性和特异性;(4)低频和高频电针刺激可以保护糖尿病小鼠胃窦和胃体组织中ICC网络不被破坏。目的以糖尿病小鼠为模型,研究在电针刺激作用下,探讨mSCF/Kit-ETV1信号通路是否参与电针对ICC网络的保护性作用。方法应用免疫印迹法检测mSCF、c-Kit、ETV1蛋白表达;应用RT-PCR检测mSCF、c-Kit和ETV1 mRNA表达;应用免疫荧光双标c-Kit与ETV1定位ICC细胞与ETV1蛋白的表达。结果(1)Westernb1ot结果显示糖尿病组小鼠胃窦和胃体mSCF、c-Kit及ETV1的蛋白表达量较正常组显著降低,而糖尿病低频刺激组和糖尿病高频刺激组胃窦和胃体组织mSCF、c-Kit及ETV1的蛋白表达量较糖尿病组明显增高;(2)RT-PCR结果显示糖尿病组小鼠胃窦和胃体组织mSCF、c-Kit和ETV1的mRNA的表达量相对于正常组明显降低,但糖尿病低频刺激组和糖尿病高频刺激组较糖尿病组mSCF、c-Kit和ETV1的mRNA的表达量却显著增高;(3)免疫荧光双标结果显示在正常组ETV1的表达胃窦和胃体组织肌间极为丰富,相互连接形成网络,紧邻ICC网络,与之伴行并伴有部分的重叠;在肌内ETV1表达在胃窦和胃体组织相对减少,其走形与肌细胞一致,大部分紧邻伴随ICC细胞的表达,可见部分重叠;在糖尿病组可见胃窦和胃体组织中肌间和肌内伴随ICC网络的中断、减弱和消失,ETV1也表达明显减少,甚至局部消失;然而,在糖尿病低频刺激组和糖尿病高频刺激组,ETV1表达同正常对照组一样,形成丰富而鲜亮的ETV1网络与完整的ICC网络毗邻,并伴有部分重叠。结论糖尿病时胃组织中mSCF、c-Kit表达下调,导致ETV1缺失,进而致使ICC网络破坏;在电针刺激作用下mSCF/Kit-ETV1信号可正常激活,维持ETV1的表达,进而保护ICC网络。目的以电针糖尿病小鼠为动物模型,观察HO-1阳性M2型巨噬细胞是否参与电针对胃组织中ICC网络的保护性作用机制方法雄性C57BL/6小鼠60只,随机分成正常对照组(Control group)、糖尿病组(DM group)、糖尿病假性刺激组(DM+SEA group)、糖尿病低频刺激组(DM+LEA group)和糖尿病高频刺激组(DM+HEA group)。成功制备糖尿病模型后,给予电针刺激干预,8周后取各组小鼠胃组织和血清。应用免疫荧光双标技术观察HO-1阳性巨噬细胞的表达;Western blot和RT-PCR技术检测小鼠胃组织HO-1和IL-10的表达情况;使用商业试剂盒评估各组血清丙二醛(MDA)的浓度;采用RT-PCR技术检测M2型巨噬细胞标志物Arg-1和CD163及M1型巨噬细胞标志物iNOS的表达。结果(1)同正常对照组比,F4/80阳性巨噬细胞数量在DM组明显增加;与DM组相比,DM+LEA组和DM+HEA组F4/80阳性巨噬细胞数量显著减少。(2)HO-1阳性M2型巨噬细胞在正常对照组、DM组及DM+SEA组几乎无表达,但在DM+LEA组和DM+HEA组表达明显增加。(3)Western blot结果显示正常对照组、DM组及DM+SEA组HO-1和IL-10蛋白表达较低,而在DM+LEA组和DM+HEA组表达较高。(4)RT-PCR结果显示正常对照组、DM组及DM+SEA组HO-1和IL-10 mRNA表达较低,而在DM+LEA组和DM+HEA组表达较高。(5)跟正常对照组相比,DM组血清MDA水平可见明显升高,而DM+LEA组和DM+HEA组血清MDA水平较DM组显著降低。(6)RT-PCR显示M2型巨噬细胞标志物Arg-1和CD163 mRNA在DM组表达低下,而在DM+LEA组和DM+HEA组表达上调;M1型巨噬细胞标志物iNOS mRNA则在DM组表达相对较高,在DM+LEA组和DM+HEA组表达较少。结论电针刺激可以促进HO-1阳性M2型巨噬细胞的表达,增加抗炎因子IL-10的分泌,减少糖尿病状态下的氧化应激水平和炎症反应,发挥保护胃组织中ICC的作用。