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第一部分小鼠听囊细胞的培养和自然分化目的:探讨从小鼠的胚胎中分离、培养、诱导听囊细胞增殖与自然分化的可能性。方法:从孕9.5-10.5天C57B6/L小鼠胚胎的听囊组织分离出听囊细胞,采用无血清培养,进行体外培养、扩增,并通过免疫荧光化学染色(nestin)进行鉴定。取传至第4代听囊细胞,接种于盖玻片上。添加血清培养基,培养15天后行免疫荧光检测和RT-PCR检测。观察听囊细胞的体外分化特点。结果:采用无血清培养法自听囊中成功地培养出听囊细胞球,利用听囊细胞球进行听囊细胞的纯化与传代,免疫荧光检测示:听囊细胞的nestin表达阳性,RT-PCR对BMP7,NESTIN,P27kip1,SOX2的检测证实其具有内耳前体细胞的特点。在含血清培养基培养15天后,免疫荧光检测证实所获听囊细胞可以在体外被诱导分化为MyosinⅦa和Synaptophysin阳性的细胞。结论:小鼠听囊中的细胞具有普通干细胞的自我复制,自我更新的特点,可分化为内耳毛细胞和神经元。第二部分小鼠听囊与听囊细胞的耳蜗移植目的:通过对移植入成年小鼠耳蜗内的听囊组织与听囊细胞的分布及分化能力的短期观察,对听囊和听囊细胞的在体内的存活、增殖能力进行分析。方法:采用9.5-10.5dpc听囊组织和Hoechst33342标记的听囊细胞,经耳蜗第二转处移植入正常成年C5786/L小鼠耳蜗中。术后1天时观察听囊组织在耳蜗内的存活与分布情况,1周时观察移植的听囊和听囊细胞在耳蜗的存活与分布情况。观察时用4%多聚甲醛磷酸盐心脏灌注小鼠,取下并固定颞骨,冰冻组织切片。结果:听囊细胞移植入正常成年C5786/L小鼠耳蜗7天后,主要分布于蜗管内基底膜表面,并可以迁移到鼓阶和前庭阶中。听囊组织1天后可以存活在鼓阶中,1周后观察到出现增殖。结论:听囊细胞短期内可以在耳蜗基底膜表面存活,可以迁移到鼓阶和前庭阶中。听囊组织短期内可以在耳蜗中存活、增殖。第三部分听觉剥夺小鼠蜗神经核的形态学改变目的:为进一步研究听觉剥夺对听觉中枢神经核团的远期影响,本实验通过切除小鼠双侧耳蜗剥夺听觉,研究术后4个月时听觉脑干中蜗神经核内神经元发生的形态学改变。方法:采用20只听力正常成年小鼠,随机分为对照组和试验组,每组10只。实验组小鼠在解剖显微镜下,用显微手术器械切除鼓室后壁,损毁耳蜗。术后进行ABR测试评估听力。术后继续饲养小鼠。4个月后处死小鼠,取脑组织进行脑干连续切片行尼氏染色和银染,研究蜗神经核的腹侧前核、腹侧后核、背侧核、章鱼样细胞核群的形态变化。结果:术后4个月实验组蜗神经核神经元数量较对照组明显减少,章鱼样细胞群具有特征性的形态学变化,细胞面积减小,细胞数目减少,细胞核团的总体积也明显低于其他核团。结论:双侧听觉剥夺四个月能够导致小鼠的蜗神经核体积减小,神经元数量减少。