【摘 要】
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鸡血藤（Spatholobus suberectus Dunn）为豆科植物密花豆的干燥藤茎[1]。化学成分主要含有黄酮类,酚酸及萜类等,主要活性成分包括黄豆苷元、甘草查尔酮A,染料木素,毛蕊异黄酮等;在现代医学和药理研究中发现,鸡血藤具有改善血液系统,抗肿瘤,抗病毒等作用。本课题组在前期对丰城鸡血藤进行了分离,并研究了其抗类风湿性关节炎作用;鸡血藤药效活性成分和作用机制研究较匮乏,故本文研究鸡血藤
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鸡血藤（Spatholobus suberectus Dunn）为豆科植物密花豆的干燥藤茎[1]。化学成分主要含有黄酮类,酚酸及萜类等,主要活性成分包括黄豆苷元、甘草查尔酮A,染料木素,毛蕊异黄酮等;在现代医学和药理研究中发现,鸡血藤具有改善血液系统,抗肿瘤,抗病毒等作用。本课题组在前期对丰城鸡血藤进行了分离,并研究了其抗类风湿性关节炎作用;鸡血藤药效活性成分和作用机制研究较匮乏,故本文研究鸡血藤抗肺癌的活性成分和作用机制。目的:1.构建鸡血藤指纹图谱,利用UPLC-Q-TOF-MS-MS初步鉴定鸡血藤化学成分,为鸡血藤质量控制提供依据。2.构建网络药理学、分子对接和细胞实验等模式研究鸡血藤抗肺癌作用机制,为后续鸡血藤抗肿瘤研究提供依据。方法:1.按中国药典相关项鉴定鸡血藤性状,显微,薄层特征,并测定鸡血藤水分含量,总灰分含量,浸出物含量,建立HPLC指纹图谱;先应用HPLC分离提取物,再应用Triple TOF 5600+型质谱检测器,进行正负离子扫描,运用peakview 1.2软件并结合相关文献进行分析;2.应用网络药理学和分子对接方法构建鸡血藤“化学成分-靶点-信号通路-肺癌”多层次网络模型对抗肿瘤作用机制进行预测。以中药鸡血藤Spatholobi Caulis为对象,通过在中药药理学系统分析平台数据库（TCMSP,http://tcmspw.com/tcmsp.php）中获得鸡血藤中活性成分和相应潜在的药物靶点,利用Gene Cards数据库（https://www.genecards.org/）收集癌症相关基因,借助Cytoscape软件构建鸡血藤活性成分-作用靶点-通路相互关系网络。应用DAVID数据库（https://david.ncifcrf.gov/）对靶点进行GO（gene ontology）及KEGG（Kyoto encyclopedia of genes and genomes）富集分析,并对KEGG信号通路进行可视化处理,将筛选出化合物进行分子对接。3.采用体外细胞实验从分子层面筛选出鸡血藤抗肿瘤的活性成分及作用关键靶点和信号通路,为鸡血藤临床应用提供科学依据。结果:1.测定10批鸡血藤水分含量小于13.0%,总灰分含量小于4.0%,醇不溶浸出物大于8.0%,均符合相关项下标准。建立了10批鸡血藤指纹图谱,采用2012版中药色谱指纹图谱相似度评价系统软件评价,结果表明10批鸡血藤均相似度大于0.85,共确定了13个共有峰;采用UPLC-Q-TOF-MS-MS法,分析鉴定了鸡血藤化学成分中的20个化合物,分别为刺槐素,木犀草素,香叶木素,圣草酚,甘草素,染料木素,刺芒柄花素,阿夫罗摩辛,儿茶素,橙皮苷,鹰嘴豆芽素A,香橙素,染料木苷,7,4’-二甲氧基异黄酮,毛蕊异黄酮,奥刀拉亭,香草酸,豆甾醇,大黄酚,芒柄花苷。2.通过网络药理学从中药鸡血藤中筛选出23个活性成分,潜在药物靶点170个,共涉及127条通路。分子对接结果表明,甘草查尔酮A、（Z）-3-（4-羟基-3-甲氧基苯基）-N-[2-（4-羟基苯基）乙基]丙烯酰胺、consume close grain与关键靶点EGFR成功对接,3个化合物的结合能小于-5 kcal·mol-1。细胞活力检测实验表明,木犀草素、甘草查尔酮A、鸡血藤提取物对人肺癌A549细胞有抑制作用。Western blot结果表明木犀草素、甘草查尔酮A、鸡血藤提取物能通过提高促凋亡因子caspase-3和Bax的表达,诱导细胞凋亡。结论:鸡血藤提取物及其化合物能通过调节细胞凋亡通路发挥抗肿瘤作用,在本实验中,鸡血藤提取物,木犀草素,甘草查尔酮A都能发挥一定的抗肿瘤作用,在其中甘草查尔酮A的抗肿瘤作用最佳。本研究将网络药理学和分子对接新技术新方法应用到传统中药鸡血藤抗肿瘤作用机制的研究,为其更好的应用于临床提供科学依据,也为其活性成分开发成新药奠定一定基础。
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