氨基糖苷类抗生素(AGAs)的抗菌谱广,抑菌能力强,但同时也会带来一定毒副作用而且在长期的临床应用中发现许多革兰氏阳性菌对其产生了耐药性,所以开发新的毒性小、药效高的AGAs类似物迫在眉睫。近年在卡那霉素B基础上发展起来的地贝卡星、阿贝卡星等药物解决了这一难题,但中国境内目前还没有此类药物的独立生产厂家,所以AGAs类衍生药物的市场前景很广阔。我们课题组利用卡那霉素B为原料合成地贝卡星和阿贝卡星的项目与山东齐鲁制药合作申请了国家十二五重大专项。实验室计划利用卡那霉素链霉菌生产KB为半合成路线提供原料,但现在KB的发酵产量很低,不足以达到工业化的要求,所以本论文围绕选育高产卡那霉素B的菌株和基因改造方面做了以下工作并取得了一定成果。首先对卡那霉素链霉菌的菌种选育进行了研究,分别考察了经过紫外线诱变、原生质体紫外诱变和耐自身代谢产物相结合的筛选后菌株的产KB能力。通过紫外线诱变和KB耐受性训练,筛选到了一株KB的生产能力为86.463 mg·L-1的卡那菌,比发酵培养基未添加KB的产量提高了23.98%,比未经诱变的出发菌株发酵产量提高了52.49%。通过原生质体诱变和KB耐受性训练,筛选到一株达到最大发酵产KB 87.500 mg.L-1的菌,比发酵培养基中未添加KB的产量提高了8.59%,比未经诱变的出发菌株发酵产量提高了54.32%。其次探讨了基因工程法改造卡那霉素链霉菌以提高KB产量。成功地构建含有nemD的基因载体,最终筛选到了两株阳性结合子,KB的产量达到94.200 U·mL-1, KB的生产能力平均提高了66.14%,比经过诱变的最高产KB的菌株提高了7.66%。同时通过PCR条件摸索成功扩增出高GC含量片段,并且采用融合PCR的方式将三个目的片段成功连接,构建了含有ne08的基因载体。