肝纤维化是肝脏对所有慢性肝部损伤的一种普遍的修复过程,其主要特征为肝星状细胞（hepatic stellate cell,HSC）激活并产生大量Ⅰ型胶原为主的细胞外基质（extracellularmatrix,ECM）,从而导致细胞外基质过度沉积。研究表明,肝纤维化的逆转伴随着肝星状细胞活性下降和细胞凋亡水平上升,抑制肝星状细胞活性和促进细胞凋亡为治疗肝纤维化的重要靶点。近几年研究表明,调控细胞的自噬可影响细胞凋亡,因此,药物对肝星状细胞自噬的调控也可能成为抗肝纤维化的有效靶点。目的:本课题旨在研究藤黄酸对胆总管结扎（bile duct ligation,BDL）诱导的大鼠胆汁淤积型肝纤维化模型的缓解作用及体内分子机制;初步探讨藤黄酸诱导肝星状细胞（HSC）自噬、凋亡及两者之间的关系。方法:1.体内实验:采用胆总管结扎建立胆汁淤积性大鼠肝纤维化模型。给予大鼠不同剂量的藤黄酸（5、10 mg/kg）灌胃。21天后检测大鼠血清中谷草转氨酶（AST）、谷丙转氨酶（ALT）、碱性磷酸酶（AKP）及总胆红素（TBIL）的水平;取大鼠肝组织进行病理切片,通过HE染色观察大鼠肝脏的肝纤维化的病理变化,通过Sirius Red和Masson染色观察大鼠肝脏胶原纤维的变化,并且测定与胶原合成有关的羟脯氨酸的含量;采用免疫组织化学检测了肝纤维化相关因子α-SMA、TGF-β、COL-Ⅰ在肝脏组织中的表达与分布;利用Real-time PCR、Western blot方法检测了与胶原合成和降解相关的蛋白COL-I、TIMP-1、MMP-2的表达变化;在藤黄酸对肝纤维化动物模型的分子机制的研究中,初步考察了藤黄酸对PI3K/Akt/m-TOR、MAPK信号通路相关蛋白的影响。2.体外实验:采用MTT法检测不同浓度（0.5、1、1.5、2μM）及不同时间（0h、6h、12h、24h）藤黄酸处理后的T6和LX-2的细胞活力。通过MDC荧光染色标记法、LC3B免疫荧光标记法及透射电镜检测T6和LX2的12h自噬的发生;Western blot分析了不同浓度（0.5、1、1.5、2μM）及作用不同时间（0h、3h、6h、12h、18h、24h、48h）的藤黄酸作用下自噬标志蛋白LC3Ⅰ/Ⅱ及自噬相关蛋白Atg3、Atg5、Atg7、Beclin1的表达变化及凋亡相关蛋白、Bcl-2、Bax、caspase-3、caspase-9和PARP的表达。加入自噬抑制剂氯喹（CQ）后利用MMT法检测肝星状细胞活力及Western blot检测LC3Ⅰ/Ⅱ、caspase-3、caspase-9、PARP蛋白表达,初步探讨自噬与凋亡的关系。结果:1.体内研究发现,藤黄酸缓解了BDL引起的大鼠肝脏功能损伤,显著降低了ALT,AST,AKP及TBIL水平,降低肝纤维化大鼠肝脏中的羟脯氨酸的含量,降低α-SMA、COL-Ⅰ的m RNA及蛋白表达。通过下调COL-I、TIMP-1、MMP-2的表达来减少ECM的生成并促进其降解。分子机制研究表明,藤黄酸下调p-Erk/Erk、p-JNK/JNK、p-p38/p38的表达来阻断MAPK通路;下调p110α、p-Akt/Akt、p-m TOR/m TOR表达来调节PI3K/Akt/m TOR信号通路。2.体外研究发现,藤黄酸对肝星状细胞活力产生抑制作用,呈时间依赖性及浓度依赖性。藤黄酸作用12h后,诱导肝星状细胞产生大量自噬溶酶体和自噬小体,同时上调细胞中LC3Ⅱ及Atg3、Atg5、Atg7、Beclin1蛋白的表达,且呈浓度依赖性。作用24h后,肝星状细胞中LC3Ⅱ及Atg3、Atg5、Atg7、Beclin1蛋白的表达则受到抑制。而肝星状细胞中凋亡相关蛋白的表达与自噬相比有所不同,藤黄酸作用12h,cleaved caspase-3/-9/PARP、Bax蛋白表达受到抑制,Bcl-2蛋白表达不变,而藤黄酸作用24小时后cleaved caspase-3/-9/PARP、Bax蛋白表达显著增高,Bcl-2表达下降。因此,为了探究藤黄酸诱导的肝星状细胞的自噬与凋亡的关系,我们应用自噬抑制剂氯喹,自噬抑制后,肝星状细胞活力较单独给予藤黄酸组显著下降,而凋亡相关蛋白cleaved caspase-3/-9/PARP表达显著增加,说明藤黄酸通过诱导的肝星状细胞自噬与凋亡抑制肝星状细胞的活力,藤黄酸诱导的早期自噬可延迟凋亡的发生。结论:本研究发现在体内藤黄酸对BDL诱导的大鼠肝纤维化具有显著的缓解作用,这是通过抑制PI3K/Akt/m TOR和MAPK途径来实现。藤黄酸通过诱导的肝星状细胞自噬与凋亡抑制肝星状细胞的活力,自噬与凋亡的关系是自噬发生于早期,延迟凋亡的发生。本课题研究结果为藤黄酸作为抗肝纤维化药物使用提供重要依据。