三基序蛋白25(tripartite motif containing25,TRIM25)是一种具有泛素化E3连接酶活性的先天性免疫蛋白分子，在介导RNA病毒感染、肿瘤细胞增殖方面发挥重要作用。研究发现，鸡TRIM25与人和小鼠之间的同源性较低，其在鸡体组织细胞中的分布和禽网状内皮组织增生症病毒（REV）感染过程中的变化规律尚未见报道，极大限制了对鸡TRIM25在抗REV感染及其致瘤过程中作用的认识。为阐明这一科学问题，本研究首先设计合成鸡TRIM25蛋白基因引物，从海兰褐鸡组织中扩增出鸡TRIM25抗原基因，经原核表达获得鸡TRIM25蛋白抗原，免疫接种兔和Balb/C小鼠，制备抗鸡TRIM25的多克隆抗体，建立检测鸡TRIM25表达的免疫组化方法和免疫印记分析方法（Western blot）；然后，利用建立的免疫组化方法对海兰褐鸡不同组织细胞中的TRIM25进行检测；第三，使用所建立的Western blot方法结合荧光定量RT-PCR方法对不同剂量REV感染后的鸡源细胞（CEF/DF1）分别动态检测鸡TRIM25的表达；第四，利用所建立的免疫组化方法和荧光定量RT-PCR方法分别对不同剂量REV感染后的海兰褐雏鸡动态检测鸡TRIM25表达。　　结果表明：（1）克隆的鸡TRIM25抗原基因大小为1012bp，构建的重组表达质粒能够在大肠杆菌中稳定表达，经纯化后的的重组蛋白能够诱导兔和小鼠产生达到效价为1∶106以上的血清抗体，经Western-blot鉴定发现制备的兔源和鼠源血清抗体能够特异性识别鸡TRIM25蛋白，血清抗体经1∶50~200稀释后可分别用于Western blot和免疫组化检测。（2）免疫组化检测发现鸡TRIM25蛋白在鸡各组织脏器中的分布存在差异，其中肺脏、胸腺、脾脏中的TRIM25蛋白含量较高；在肺组织中主要存在肺泡周围的内皮细胞、淋巴细胞等的胞质内，脾组织主要出现在脾淋巴细胞和血管内皮细胞等的胞质中；肝组织中主要出现在肝小叶肝细胞、淋巴细胞以及血管内皮细胞胞质中。（3）荧光定量RT-PCR和Western-blot检测结果均显示鸡TRIM25表达在CEF和DF1细胞感染REV后表现为相同的表达规律；感染后2h有所下降，随后出现升高，8h达到第一峰值；感染12h表达量趋于降低，随后逐渐增加，至48h-72h出现第二次表达高峰；随后96h有所下降；另外，鸡TRIM25表达随REV感染剂量增加而下降。（4）荧光定量RT-PCR检测发现雏鸡感染不同剂量REV后胸腺、脾脏、法氏囊、肺脏和肝脏组织TRIM25mRNA表达均逐渐升高，高剂量感染组较低剂量感染组升高显著；免疫组化结果也显示感染REV后3周，鸡肺脏、脾脏和肝脏中相应细胞内均存在不同程度TRIM25的高表达。同时在这些组织中检测到不同REV病毒载量。　　通过上述研究，获得能够特异性识别鸡TRIM25蛋白的多克隆抗体，并建立检测其表达的免疫组化方法以及Western blot方法，了解了鸡TRIM25在不同组织细胞中的表达分布和REV感染后在CEF和DF1细胞中以及雏鸡体内不同组织中的表达规律，为深入研究鸡TRIM25蛋白的功能提供了物质基础和方法依据。