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中药中含有众多的有效活性成分,应用其治疗疾病成为现代医药发展的趋势,吸引了众多化学,药学及生物学工作者投身于这一新研究领域中来。生物碱是中药中的一类很有价值的生物活性物质,特别是生物碱的抗肿瘤作用、作用于神经系统、作用于心血管系统和抗菌作用已经引起全世界的关注。而异喹啉生物碱和甾体生物碱在天然产物化学中一直占有重要的地位。系统的研究异喹啉生物碱和甾体生物碱的化学及生物活性,可以为寻找有活性的先导化合物、进一步开发成为新药提供一定的依据。本文用微量量热法研究了中药中的异喹啉生物碱和甾体生物碱对大肠杆菌代谢的作用,借助热活性检测仪对细菌正常代谢及两类生物碱作用下代谢过程的热谱曲线进行测定,并分析热谱图、构建细菌生长的理论模型和热动力学方程,比较了不同中药的生物碱对细菌代谢的作用效果,从而确定了最佳抑菌浓度或最佳生长浓度,为指导新特效药的合成及药物的筛选提供理论依据。 1.本文的主要研究内容与结论: 1.1异喹啉类生物碱的提取和分离 对异喹啉生物碱的提取,按照不同的文献方法,采用不同的提取步骤,但就整体来讲采用的是醇类提取法。先用醇将生物碱溶解,醇提取液减压浓缩,得粗的生物碱。然后进行进一步的分离纯化。用稀酸水溶解,过滤除去不溶解的非碱性脂溶性杂质。此外,未除净的脂溶性杂质,可用乙醚或氯仿等有机溶剂萃取。然后酸液中加入无机碱使生物碱游离,再用有机溶剂萃取,萃取液回收溶剂后即得生物碱。 1.2甾体类生物碱的提取和分离 对甾体类生物碱的提取,按照不同的文献方法,采取不同的提取步骤,整体来讲是采用醇类提取和亲脂性有机溶剂提取法。亲脂性有机溶剂提取法,先用碱水湿润后再用有机溶剂浸泡,使其溶解,浓缩提取液即得粗碱,然后加稀酸(如1-2%HCI),则成溶于水的生物碱盐,浓缩水溶液,用乙醚等有机溶剂脱脂后,加碱使之游离,再用氯仿等有机溶剂革取,浓缩革取液,干燥后得生物碱。1.3生物碱对大肠杆菌代谢作用的规律研究 为了比较不同中药中的生物碱对大肠杆菌的作用效果,首先用DMF和水配制成生物碱液,然后取不同量的生物碱液加入培养基中形成悬浮液,测定了 31 OK时大肠杆菌在牛肉膏汤培养基中生长的热功率一时间曲线,用 LOgistiC方程对大肠杆菌的指数生长期进行处理,得到了大肠杆菌在含不同浓度的生物碱液的培养基中代谢的生长速率常数,求出生长速率常数与浓度之间的关系,进而确定了最佳抑菌或最佳生长浓度。比较它们的最佳抑菌浓度,结果表明,对于不同药物的异唤林生物碱来说,大多数是抑制大肠杆菌生长,抑菌作用大小顺序为厚朴>莲子。。>黄柏>粉防己汁大功劳>延胡索>山豆4gu苦地丁;对于不同药物的笛体类生物碱来说,龙葵和白英抑制大肠杆菌生长,而浙贝母则促进大肠杆菌生长。二.本文的创新之处2.且 微量量热法用于中草药的抑菌研究是一种新的手段,首先它能够直接监测生物体所固有的热力学过程,不需要添加任何试剂,所以不会引入干扰生物体正常活动的因素;其次它不需要制成任何透明的澄清溶液,可直接检测微生物的组织和悬浮液;其三热测量完毕之后,并没有影响到研究对象,还可以补充必要的后继分析。它不仅能提供热力学数据,而且可以提供动力学的信息。因此量热技术已成为一种新的、很有前途的研究手段,比抑菌圈法,光度法等方法更加方便可靠。2.2 近年来,对于生物碱类化合物对细菌的作用虽有报道,但尚缺乏系统性。生物碱是一类具有应用价值的生物活性物质,我们将异喷淋生物碱和笛体生物碱从中药中分离出来,作为研究的体系,测定了大肠杆菌在含有不同浓度异色琳生物碱和笛体生物碱的培养基中生长代谢的热功率一时间曲线,将实验数据进行处理,得出两类生物碱对大肠杆菌代谢作用的规律,为生物碱在医学上的应用提供了理论基础。2.3 用构建的细菌生长模型,计算了不同浓度的异唾琳生物碱和笛体 3生物碱作用下细菌的生长速率常数,并建立了它们的浓度与生长速率常数的关系式,确定了不同的生物碱对细菌代谢作用的最佳浓度。生物碱一般被认为是抗菌类的物质,但是我们却发现有些生物碱在浓度小时有促菌的作用,随着浓度的增大有抑制作用。而对于浙贝母生物碱,却发现是促进大肠杆菌生长。