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以纯化的中华鳖虹彩病毒为抗原免疫Balb/C小鼠,经细胞杂交融合、筛选,制备出分泌抗中华鳖虹彩病毒特异性单克隆抗体的细胞系,分析了中华鳖虹彩病毒单克隆抗体的免疫生物学特性,建立了能够用于检测中华鳖虹彩病毒的ELISA、IFA方法,应用中华鳖虹彩病毒单克隆抗体对蛙虹彩病毒属STIV、RGV、FJIV三株病毒的抗原性进行了初步的比较分析。获得如下结果:1、中华鳖虹彩病毒的提取与纯化:对中华鳖虹彩病毒的三种不同的纯化方法进行比较分析,结果表明两次冻融后差速离心的方法纯化病毒纯度差,回收率较低;磁力搅拌加上超声处理后差速离心可以提高病毒粒子的回收率,但容易造成病毒结构破坏;匀浆、磁力搅拌,差速离心结合蔗糖密度梯度离心方法可获得高纯度的病毒样品,电镜观察和SDS-PAGE分析进一步证实最后一种方法提纯的病毒纯度高、结构完好,可用于免疫Balb/C鼠。2、中华鳖虹彩病毒单克隆抗体的制备:以纯化的中华鳖虹彩病毒抗原免疫Balb/C小鼠,取免疫小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行杂交融合,经过初筛、复筛和三次有限稀释法克隆,获得8个能稳定分泌抗中华鳖虹彩病毒特异性单克隆抗体杂交瘤细胞株,分别命名为Mab2A4、Mab8E1、Mab1D3、Mab2H1、Mab3A1、Mab485、Mab5E1和Mab6F2。3、中华鳖虹彩病毒单克隆抗体免疫生物学特性分析:单克隆抗体亚级份分析结果表明,Mab2A4属IgA,Mab8E1是IgG2a,其他的6株单抗1D3、2H1、3A1、485、5E1和6F2的亚级份均为IgG1。ELISA分析表明,8株单抗均能特异性地识别中华鳖虹彩病毒抗原,与EPC、Co、FHM等宿主细胞抗原不产生任何交叉反应,腹水抗体的ELISA效价在10-4～10-6之间。IFA分析表明,8株单抗中仅Mab5E1没有免疫荧光反应特性,其余7株单抗均能对染毒病灶产生特异性的荧光染色。中和试验结果证实8株单抗均没有中和病毒的特性。Western-blot结果显示,Mab1D3和Mab2A4分别识别分子量为84kDa和35kDa中华鳖虹彩病毒结构蛋白,Mab3A1能够同时识别分子量分别为14kDa、15kDa和16kDa的三条多肽,其余单抗不具备Western-blot反应特性。这些结果提示上述单抗对中华鳖虹彩病毒抗原高度特异、灵敏,可用于中华鳖虹彩病毒的检测和结构蛋白分析。4、单克隆抗体在虹彩病毒研究中的应用:应用中华鳖虹彩病毒单克隆抗体对蛙病毒属的STIV、RGV、FJIV三株病毒进行交叉反应,结果表明8株单抗与三种不同来源的蛙病毒抗原均有ELISA反应特性,除了Mab5E1外,其余单抗与三种不同来源的蛙病毒抗原均有IFA反应特性。结果表明蛙病毒属的STIV、RGV、FJIV三株病毒抗原性高度一致,可能提示蛙病毒属属特异性抗原位点高度保守。虹彩病毒结构复杂,揭示虹彩病毒的致病和免疫机理难度大。中华鳖虹彩病毒单克隆抗体的成功制备为分析蛙病毒属病毒的结构蛋白与功能,病毒复制、装配,以及侵染宿主和康复过程病毒粒子的分布与消长提供了十分有用的工具,并奠定重要的技术基础。