白虎汤纳米相态中化学成分的初步研究

来源 :黑龙江中医药大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:moke707
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化学成分是中药复方功效的物质基础,所有研究只有结合成分研究,才能进一步探讨药效、作用机理及其他相关性研究。本文来源于国家自然科学基金课题“基于中药药剂复方药性传递假说的白虎汤液中多成分纳米相态解析及其与原方立法意图和功效相关性研究”,已有前期研究结果表明,白虎汤中存在纳米相态,这种相态对难溶性成分芒果苷具有增溶作用。同课题组人员对白虎汤液相态拆分后发现,白虎汤液发挥解热作用的有效相态为纳米相态。因此,对白虎汤纳米相态中的化学成分进行研究,具有重要意义。目的:本文以白虎汤纳米相态为切入点,对其中部分化学成分进行初步的分离研究,确定各成分在白虎汤纳米相态中的分布情况,为白虎汤纳米相态的物质基础研究提供科学资料,为中药药剂复方药性传递假说的深入研究奠定基础。方法:(1)采用TLC法鉴别白虎汤纳米相态中芒果苷、新芒果苷、甘草苷、甘草酸铵4个主要成分;HPLC法建立上述4个成分的含量测定方法。(2)通过单因素试验,对比了盐溶法和碱溶酸沉法拆分白虎汤纳米相态中蛋白质的效果;结合星点设计-响应面法优化白虎汤纳米相态中蛋白质的拆分工艺;经(NH4)2SO4溶液盐析,膜透析过程纯化蛋白质;采用考马斯亮蓝法建立白虎汤纳米相态中蛋白质组分的含量测定方法。(3)采用醇沉法拆分白虎汤纳米相态中的多糖组分;采用苯酚-硫酸显色法测定多糖组分的含量,并根据正交设计法优化显色条件;通过三氯乙酸法去除多糖组分中的杂质蛋白;采用膜透析技术,纤维素柱层析、葡聚糖凝胶柱层析过程纯化粗多糖组分。(4)在前期对白虎汤纳米相态中蛋白质组分、多糖组分的拆分研究基础上,以粒径,TEM为测定指标,初步研究白虎汤纳米相态中的多糖组分、蛋白质组分对纳米相态形成的影响。结果:(1)TLC法准确可靠的鉴别了白虎汤纳米相态中存在的芒果苷、新芒果苷、甘草苷、甘草酸铵各成分;经HPLC法测定上述各成分的含量分别为0.311 mg/mL,0.152mg/mL,0.079mg/mL,0.058mg/mL。(2)碱溶酸沉法拆分白虎汤纳米相态中蛋白质组分的效果优于盐溶法;星点设计-响应面法优化拆分白虎汤纳米相态中蛋白质组分的工艺为:液料比16:1,pH9.5,加热时间90 min,加热温度32℃。此时,蛋白质平均得率为26.74%,RSD为1.68%(n=3);经(NH4)2SO4溶液盐析,膜透析过程纯化后的蛋白质粉末含量为0.17mg/mL。(3)醇沉法拆分白虎汤纳米相态中多糖成分的最佳条件为:醇沉浓度80%,静置12 h,醇沉2次;苯酚-硫酸显色法测定多糖组分含量的最佳显色条件为:苯酚1.5 mL、浓硫酸7 mL、反应温度100℃、反应时间为10 min;粗多糖经三氯乙酸法除蛋白,膜透析,柱层析等过程纯化后得到均一多糖组分,含量为0.22mg/mL。(4)当多糖、蛋白质组分存在于白虎汤纳米相态药液中时,经TEM图可发现白虎汤纳米粒子形态较清晰,呈现球形,连续分布,粒子信息较丰富,而去除多糖、蛋白质组分后,白虎汤纳米粒子细碎,形态不好,且发生聚集。结论:白虎汤纳米相态中分布着芒果苷、新芒果苷、甘草苷、甘草酸铵黄酮类成分,其中芒果苷是主要成分,含量达到了 0.311 mg/mL。亦存在多糖、蛋白质类成分。确定了碱溶酸沉法作为白虎汤纳米相态中蛋白质类成分的提取方法;确定了考马斯亮蓝法作为白虎汤纳米相态中蛋白质类成分的含量测定方法;经(NH4)2SO4溶液盐析,膜透析过程纯化后的蛋白质粉末含量达到了 0.17 mg/mL。采用分级醇沉法对白虎汤纳米相态中的多糖组分进行粗分,得率较高;确定苯酚-硫酸显色法作为白虎汤纳米相态中多糖组分的含量测定方法;确定采用三氯乙酸法去除多糖组分中的杂质蛋白;采用膜透析技术、纤维素柱层析、葡聚糖凝胶柱层析过程纯化粗多糖组分,并得到均一多糖组分,含量是0.22mg/mL。通过测定粒径和TEM发现,多糖蛋白类成分对于白虎汤纳米相态的形成存在显著影响。
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