目的：内皮功能障碍和炎症是动脉粥样硬化（Atherosclerosis，AS）的始动环节。内皮祖细胞（endothelial progenitor cells，EPCs）是内皮细胞的前体细胞，参与内皮细胞的损伤修复。内脏脂肪素（Visfatin）能增加内皮细胞炎症因子细胞间黏附分子-1（intercellular adhesion molecule1，ICAM-1)和血管细胞黏附分子-1（vascular cell adhesion molecule1，VCAM-1）的mRNA表达，但Visfatin是否能增加EPCs细胞表面ICAM-1和VCAM-1的表达，进而损伤EPCs修复能力尚未可知。本研究采用外源性重组人Visfatin刺激EPCs，观察细胞表面ICAM-1和VCAM-1表达的变化，并用核因子kB（Nuclear factor kappa B，NF-kB）通道抑制剂吡咯烷二硫代氨基甲酸盐（pyrrolidine dithiocarbamate, PDTC）处理细胞，探讨外源性人Visfatin对EPCs的致炎作用及相关机制。方法：1体外分离培养人内皮祖细胞取健康足月剖腹产妇新鲜脐带血，用等体积PBS缓冲液稀释，加入一定体积的人淋巴细胞分离液，室温2000rpm/min离心25分钟分离获得人单个核细胞（Mononuclear cells，MNCs），密度1×106/ml接种于纤维连接蛋白（Fibronectin，FN）包被的培养瓶中，人EPCs专用培养基培养，37℃、5%CO2孵箱内培养，每天在倒置显微镜下观察细胞生长形态学变化，并记录，第3天换液，弃未贴壁细胞，第7天时传代。用流式细胞仪检测细胞表面CD34、CD133、CD309三阳性细胞，用激光共聚焦显微镜观察Dil标记乙酰化低密度脂蛋白（Dil-acLDL）和FITC标记荆豆凝集素（FITC-UEA-I）双染色的细胞。2Visfatin刺激内皮祖细胞培养7-10天的细胞传代后铺6孔板，实验分为4组①Control（对照组）；②Visfatin（10ng/ml）③Visfatin（20ng/ml）④Visfatin（50ng/ml）。Visfatin孵育EPCs24小时后以反转录聚合酶链反应（Reverse transcriptionpolymerase chain reaction，RT-PCR）检测各组细胞表面ICAM-1和VCAM-1mRNA的量，结果以荧光强度表达，48小时后用流式细胞仪检测细胞表面ICAM-1和VCAM-1蛋白的表达量。3吡咯烷二硫代氨基甲酸盐（PDTC）对Visfatin刺激EPCs的作用培养7-10天的细胞传代后铺6孔板，实验分为4组①Control（对照组）；②Visfatin（50ng/ml）③PDTC组（100uM）④PV[PDTC（100uM）+Visfatin（50ng/ml）]。PDTC100uM预处理EPCs2小时后，Visfatin孵育EPCs24小时，RT-PCR检测各组ICAM-1和VCAM-1mRNA的量，48小时用流式细胞仪检测细胞表面ICAM-1和VCAM-1蛋白的表达量。结果：1人单个核细胞培养24-48小时后细胞呈圆形，多数悬浮在培养液中，3-4天后细胞逐渐贴壁，约40-50%贴壁细胞呈梭形，5-7天贴壁细胞出现细胞集落，10-14天细胞呈“铺路石”样外形，增殖能力强。2培养7天时大部分细胞能够结合FITC-UEA-I，并吞噬Dil-acLDL，双荧光染色实验阳性。3流式细胞仪检测培养7天EPCs表面CD34、CD133、CD309表达率分别为43.12%，36.03%和67.76%。4Visfatin对EPCs细胞表面ICAM-1和VCAM-1转录水平的影响：Visfatin刺激EPCs后ICAM-1和VCAM-1的mRNA的量增加，随着Visfatin浓度的增加，EPCs细胞表面ICAM-1和VCAM-1mRNA的量随之增加,呈一定的量-效关系。5Visfatin对EPCs细胞表面ICAM-1和VCAM-1蛋白表达水平的影响：Visfatin刺激EPCs后流式细胞仪检测4组（0,10ng/ml，20ng/ml，50ng/ml）细胞表面ICAM-1蛋白的表达量分别为18.25±3.77%，25.40±4.25%，38.88±4.02%和48.83±5.12%，有统计学差异（p<0.05）；VCAM-1蛋白的表达量分别为6.75±2.07%，10.65±2.33%，17.11±2.37%和24.82±3.19%，有统计学差异（p<0.05），均呈一定的量-效关系。6PDTC对Visfatin刺激EPCs细胞表面ICAM-1和VCAM-1转录水平的影响：PV组与Visfatin（50ng/ml）组比较，ICAM-1和VCAM-1的mRNA的量下降。7PDTC对Visfatin刺激EPCs细胞表面ICAM-1和VCAM-1蛋白表达水平的影响：ICAM-1蛋白的表达量PV组低于Visfatin（50ng/ml）组（45.25±2.95%vs18.44±1.97%），有统计学差异（p<0.05）；VCAM-1蛋白的表达量：PV组低于Visfatin（50ng/ml）组（22.92±2.46%vs6.82±1.79%），有统计学差异（p<0.05）；Control组和PDTC组的ICAM-1和VCAM-1蛋白的表达量无统计学差异（p>0.05）。结论：1用脐带血体外培养EPCs方法可行。2外源性重组人Visfatin能够刺激EPCs表面ICAM-1和VCAM-1的mRNA和蛋白表达量增加，并呈一定的量-效关系。3PDTC抑制EPCs表面ICAM-1和VCAM-1的mRNA和蛋白表达量，提示Visfatin对EPCs的致炎作用可能是通过NF-kB途径进行调控的。