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目的:Jak2激酶(Janus kinase)属于非受体酪氨酸激酶,通过各种受体(如:红细胞生成素受体)介导的细胞信号转导途径,在细胞增殖中发挥着重要的作用。Jak2基因突变如:Jak2 V617F,Jak2 exon12与骨髓增殖性肿瘤(myeloproliferative neoplasms,MPN)的发生密切相关。为了筛查是否还有其它突变位点,我们选取部分MPN确诊病例(Jak2 V617F,Jak2 exon12突变均为阴性)进行Jak2基因c DNA全长测序,结果发现有新的转录本存在。本研究旨在证实新转录本的真实存在,鉴定其RNA结构,预测其蛋白结构,同时分析其在MPN、AL、CML、健康人及其他物种中的表达情况。方法:1.两个新转录本的发现与鉴定用随机引物进行逆转录,为了消除非特异扩增,针对Jak2b和Jak2c的序列在Jak2基因不同位置设计两对引物F1/R1和F2/R2,通过聚合酶链式反应(PCR)联合测序鉴定两个转录本存在;用oligo(d T)引物鉴定这两个转录本是否是带有Ploy A尾的成熟m RNA。2.两个新转录本全长测序分析,对目的RNA进行逆转录聚合酶链反应(RT-PCR),扩增Jak2基因CDS序列,测序鉴定。3.用RT-PCR鉴定两个新转录本在不同物种中的表达。结果:1.用随机引物和引物F1/R1和F2/R2进行RT-PCR反应,联合电泳并测序分析,结果显示两种新转录本Jak2b和Jak2c是真实存在的;用oligo(d T)引物和引物F1/R1和F2/R2进行RT-PCR反应,同样联合电泳并测序分析,结果显示两种新转录本Jak2b和Jak2c是成熟的m RNA;在正常人中也检测到这两个新转录本,由此证明转录本Jak2b和Jak2c是生理性的成熟m RNA。2.转录本Jak2b是外显子10的3’端缺失了77个核苷酸,预测形成了421个氨基酸的截短型蛋白。另一个转录本Jak2c是外显子10全部缺失,预测形成了415个氨基酸的截短型蛋白。3.野生型Jak2转录本在哺乳动物中均有表达,在低等生物中不表达,而新转录本Jak2b和Jak2c在MPN、AL、健康人和新西兰大白兔中表达,在SD大鼠、小鼠和低等生物中不表达。结论:1.Jak2基因除了野生型转录本Jak2a,还存在转录本Jak2b和Jak2c。转录本Jak2b是位于Jak2基因第10外显子3’端77bp的缺失所致,转录本Jak2c是Jak2基因第10外显子的缺失所致。2.两个新转录本Jak2b和Jak2c是生理性的带有Ploy(A)尾的成熟m RNA;在不同物种中的表达是有差异的。