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内生菌是普遍存在于健康植物组织内部的一大类微生物。植物内生菌能够产生与宿主相同或相似的化学成分,大多数植物体内均有内生菌,并且这些内生菌表现出了丰富的生物活性。绿绒蒿属植物含有丰富的化学成分,且具有多种药理作用,至今未见绿绒蒿属植物内生菌方面的研究报道。鉴于此我们选用四种绿绒蒿属植物黄花绿绒蒿(Meconopsis chelidonifolia)、红花绿绒蒿(M. punicea)、蓝花绿绒蒿(M. henrici)、全缘叶绿绒蒿(M. integrifolia)作为植物材料,对绿绒蒿属植物的内生真菌及其代谢产物的生物活性进行研究。 采用组织块分离法及研磨法从四种绿绒蒿中共分离得到49株内生真菌,并对其中12株产孢的内生真菌进行了形态鉴定。鉴定结果表明:它们分别属于青霉属Penicillium(4株)、粘帚霉属Gliocladium(2株)、链格孢属Alternaria(2株)、假丝酵母属Candida(1株)、毛霉属Mucor(1株),小单头孢霉属Acremoniella(1株)和线孢盘菌属Ostropa(1株)。 对49株内生真菌的发酵液分别用乙酸乙酯和正丁醇进行萃取,对菌体用甲醇提取,共得到147个样品。对24株菌的胞外多糖和胞内多糖进行提取,共得到48个多糖样品。并测定了多糖含量,其中菌株 YS101胞外多糖最多,为0.8856g,(250mL发酵量)。 发酵产物抗氧化活性结果表明:萃取和提取得到的147个样品中13个样品总还原能力维生素 C相当含量超过200μg/mg,11个样品 DPPH清除率达到80%,羟自由基清除率普遍较低。48个多糖样品中有6种多糖样品DPPH自由基清除活性超过30%。有8种多糖样品羟自由基清除率超过30%,并且都是胞外多糖。 采用滤纸片法对绿绒蒿49株内生真菌发酵产物进行抑菌活性测定,测定结果表明:各提取物溶液浓度为10mg/mL时乙酸乙酯部位抑菌效果明显高于甲醇部位及正丁醇部位。其中YR202乙酸乙酯部位、QL205甲醇部位和RL201正丁醇部位抑菌活性最显著。 对菌株YL201乙酸乙酯萃取部位进行分离,得到1个化合物,经鉴定为2-乙酰基-4(3H)喹唑酮。对抗氧化活性较好的5株菌进行了分子生物学方法鉴定,结果表明:他们分别属于青霉菌属Penicillium(YL202、YL201)、镰刀菌属Fusarium(RL201)、链格孢属Alternaria(RL207)、念珠菌属Candida(QL205)。