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纤维素酶在一切以植物为原料的加工业中,如酿造、果汁与蔬菜汁加工、粮食加工、食品、饲料、造纸、中草药有效成分提取、植物基因工程和细胞工程以及原油开采、纺织工业、废水处理、生物能源生产等各个方面,均有很大的应用价值。目前关于纤维素酶方面的研究很多,主要瓶颈性的问题在于目前用于纤维素酶的生产菌如里氏木酶,青霉等,酶活力都比较低,纤维素酶用量大,成本高。高产纤维素酶的菌株,较优的发酵工艺条件以及适宜的酶反应体系条件,都能提高纤维素酶活,有效的降低纤维素酶的成本。本文从岳麓山枯枝腐木土壤下采样,利用刚果红培养基进行优良产纤维素酶菌株的筛选,通过不同物理方法对其进行诱变选育,并通过显微镜和16s rDNA对突变株进行综合的分子鉴定,并对其发酵工艺进行优化条件进行了考察,同时对纤维素酶的反应体系条件和酶学性质进行了初步的研究,主要结果如下:1.从自然界枯枝腐木土壤层下取样,筛选出较高产纤维素酶的菌株A24,其CMCase酶活为20.37U/mL与FPAase酶活为1.20U/mL。2.对出发菌株A24,进行紫外诱变,最佳时间为7min。在此条件下筛选获得了一株遗传稳定性好而且CMCase酶活为25.35U/mL,FPAase酶活为1.33U/mL的突变株UV-37。对UV-37进行60Co-Y射线诱变,最适诱变剂量为0.6KGy。在此条件下获得一株遗传稳定性好而且纤维素酶活分别比野生菌提高了137.16%与118.80%的突变株Co-07。3.通过对菌株的菌落、菌丝、以及孢子丝的形态进行显微镜观察,可以看出辐射状的菌落,有较细的基内菌丝和气生菌丝以及螺旋状的孢子丝,从镜检形态上基本可以确定为链霉菌属。对菌株的16s rDNA进行扩增、测序,利用NCBI数据库进行Blast比对,经MEGA5.0软件构件系统发育树后可以确定为链霉菌属中的三泽链霉菌亚种。4.通过产酶培养条件的单因素实验和正交实验,最终得到的最优外部产酶培养条件为:50mL装液量,175r/min转速,40℃,发酵120h,CMC酶活可达到74.06U/mL。依据单因素实验得出最佳碳源为稻草粉,浓度为2.5%,氮源对本菌株产酶的影响不大,而磷酸盐的最佳浓度为4%。由装液量、稻草粉、磷酸盐(KH2PO4)为主要影响因素的响应面优化实验,最终的响应面优化结果为表明3个因素对产酶都有极显著的影响。通过SAS9.1软件所建立的优化模型,其R2=99.80%,能较好的模拟实际实验,响应面优化后的最终条件为:装液量(X1)=60mL,稻草粉(X2)=2.8%,KH2P04(X3)=4.2%,CMC酶活为94.16U/mL。5.通过对本菌中CMC酶反应体系的研究,初步得出最佳的酶促反应体系:经过适当稀释的酶液,在pH6.0的环境下,底物浓度为1.0%的体系中,于50℃水浴中,酶促反应30min后,加入3.0mLDNS,煮沸10min。通过对纤维素酶相关酶学性质的研究,CMC酶活在40℃与50℃的条件下,热稳定很好,70℃时,热稳定较差。CMC酶活在pH值6.0时,稳定性很好,在过酸与过碱条件下稳定性很差。