血管内皮生长因子对胶质瘤的微生态系统形态学及水孔蛋白4表达的影响

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目的探讨血管内皮生长因子(VEGF)对神经胶质瘤的微生态系统(NGMES)形态学及水孔蛋白4(AQP4)在胶质瘤中表达的影响。方法(1)利用经鉴定正确的含有正义/反义VEGF164 基因片断的pBudCE4.1 质粒重组子对C6细胞按脂质体法进行转染并筛选,ELISA 方法检测培养的阳性克隆子上清液中VEGF 的含量;(2)利用已鉴定的经抗性筛选的稳定表达正义/反义VEGFcDNA 的C6 细胞进行裸鼠皮下接种形成胶质瘤的模型,动态记录肿瘤生长情况,21 天时处死裸鼠,取原发肿瘤测量其重量和体积;(3)光镜及电镜下观察不同种植瘤及其周围组织结构的形态学改变;(4)免疫组织化学方法检测VEGF和水孔蛋白4 在不同种植瘤内的表达情况。结果(1) ELISA 方法检测稳定表达正义VEGFcDNA 的C6细胞分泌的VEGF 量增高,稳定表达反义VEGFcDNA 的C6细胞分泌的VEGF 量明显降低;(2) 转染有反义VEGF 基因的C6胶质瘤的生长速度、肿瘤体积、重量明显降低,而转染有正义VEGF 基因的C6胶质瘤的生长速度、肿瘤体积、重量与C6胶质瘤相比无明显差别;(3) 与稳定表达正义VEGFcDNA 的C6胶质瘤、转染空载体和未经转染的C6胶质瘤相比,稳定表达反义VEGFcDNA 的C6胶质瘤血供少,无明显出血坏死,瘤周血管反应轻,瘤周水肿及侵袭不明显,血管内皮细胞浆内小泡囊状细胞器(VVO 样结构)较少;(4) 与稳定表达正义VEGFcDNA 的C6胶质瘤、转染空载体和未经转染的C6胶质瘤相比,稳定表达反义VEGFcDNA 的C6胶质瘤中免疫组织化学方法检测VEGF 及水孔蛋白4 的表达水平较低。结论(1) 反义VEGF 基因能有效地下调C6胶质瘤细胞中VEGF 的表达水平,用pBudCE4.1 作为转染的载体不会对VEGF 的表达水平产生影响;(2) VEGF 是影响胶质瘤生长的一个重要因素,通过对C6胶质瘤细胞中VEGF 表达的下调可以
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