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猪流行性腹泻(PED)是由冠状病毒属的猪流行性腹泻病毒(PEDV)引起的一种以仔猪水样腹泻、呕吐、脱水为主要特征的接触性肠道传染病。猪流行性腹泻是世界上流行最广泛的猪病之一。近年,猪流行性腹泻作为烈性传染病,开始疯狂肆虐我国广大养殖户。我国的广东、广西、江西、湖南、福建、浙江、安徽、江苏、湖北、河北和山东等省(自治区)均有猪流行性腹泻的发现。PED在我国的流行面逐渐扩大,对26个省市自治区的调查表明PED的总死亡率占36种疾病总死亡率的1.74%。该病多发于冬春季节,但就广东地区这个全年高湿度的环境,PED呈高发趋势,全年均可发生,7天龄内的新生仔猪在发生腹泻后3?4天,通常因脱水导致衰竭而死亡,病死率高达100%。目前,在广东粤西地区,猪流行性腹泻呈高发趋势,一旦进入冬春季节,该病都是大规模爆发,病死率高。虽然可以采取疫苗接种方式来控制此病流行,但经典的CV777株疫苗免疫后效果并不理想,接种过疫苗的猪场仍然有此病的流行。本研究主要分为下面三个部分:1、PEDV-YX株的分离鉴定。本研究从广东粤西9个疑似发生腹泻疫情的规模化猪场采集180份病料样本。通过在Vero细胞培养基中添加胰酶的方法孵育、选取1%接毒量接种Vero单层细胞,进行病毒分离纯化,从中分离出9株未知病毒HS1、HS2、HS3、HS4、YC1、YC2、YC3、YC4和KP,经胶体金快速诊断技术、RT-PCR扩增、基因序列比对,确诊均为猪流行性腹泻病毒(PEDV)。通过猪体回归试验,选取临床症状最明显,毒力最强的YC1毒株作为研究对象,命名为PEDV-YX株。在胰酶总浓度为7.5ug/ml的作用下,盲传到第8代,能观察到细胞圆缩、聚集,空泡增多等明显的细胞病变。2、对PEDV-YX株生物学特性、中和试验及其TCID50测定研究。对PEDV-YX株生物学特性、中和试验及其TCID50研究表明,该分离株对5-Brd U不敏感,为具有囊膜的RNA病毒;对乙醚、氯仿敏感;在pH为3.0的环境下易失活;对热敏感,在50℃条件下作用1h,病毒易失活;设计特异性引物,进行RT-PCR扩增,电泳检测得到与预期长度一致的条带;与PEDV抗血清中和效价为120.23;PEDV-YX F10的TCID50为10-5.67/0.1ml。3、PEDV-YX株氢氧化铝胶灭活疫苗制备及不同免疫剂量、不同免疫途径对抗体水平的影响研究。PEDV-YX株F10经0.3%的甲醛溶液灭活,以病毒液样40ml+PBS40ml+20ml铝胶佐剂的培苗方案,配制猪流行性腹泻灭活疫苗。以口服免疫、后海穴注射免疫为免疫途径,2ml、1ml、0.5ml不同免疫剂量,研究该灭活疫苗的抗体消长规律。当免疫剂量相同时,后海穴注射免疫比口服免疫抗体效价更高,且抗体维持时间更长;当免疫途径相同时,免疫2ml的抗体整体水平比免疫1ml的更高,免疫0.5ml的中和抗体水平最低。通过分离广东粤西地区PEDV的流行性毒株,为了解该地区流行性毒株的特性及流行情况,建立PEDV快速准确的诊断方法及新型疫苗的研究提供理论依据,从而为制定有效的防控措施,促进该地区养猪业的稳定发展做好铺垫。